細胞外シグナルを制御する新しいプリンヌクレオチド代謝酵素

一种控制细胞外信号的新型嘌呤核苷酸代谢酶

基本信息

批准号：
09877432
负责人：
堅田利明
金额：
$ 1.41万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877432/
关键词：
リンパ球アストロ細胞 CD38 PC-1 エクト型酵素 NADアーゼホスホジエステラーゼ

项目摘要

先に申請者の研究グループは、レチノイン酸によるヒトHL-60細胞の好中球への分化過程でエクト型NAD分解酵素(NADase)が細胞表層に誘導され、この酵素活性がリンパ球表面抗原のCD38によって担われることを明らかにした。本研究では、細胞表層上の新しい機能分子と期待されるCD38及びこれと関連するプリンヌクレオチド代謝酵素につき、それらの生理機能と酵素化学的特性、転写調節の機構などを検討し、以下の知見を得た。1.IgG_1サブクラスに属する抗CD38モノクローン抗体でリンパ球系の細胞を刺激すると、複数の細胞内機能蛋白質がチロシンリン酸化されたが、この作用はCD38抗体のFc部分がFcγII受容体を刺激した結果であった。2、ラット脳の初代培養法により、各種のグリア、神経細胞を分取してラットCD38の局在を解析した結果、CD38はアストロ細胞に強く発現しており、またその細胞表層には顕著なNADase活性が認められた。さらに共焦点レーザー顕微鏡を用いた観察から、アストロ細胞のCD38は斑点(cluster)状の構造をとり、基質NADの添加によって細胞内陥入(internalization)することが明らかにされた。3、これらリンパ球系と神経系の細胞表層には、CD38とは別にヌクレオチドを基質とするPC-1様の酵素(phyrophosphatase/phosphodiesterase)活性が存在し、その一部は分泌型の性状を示した。4、推定された分泌型PC-1のN末端配列を決定し、プロセッシング部位を同定した。5、ヒトCD38遺伝子の遺伝子発現について解析し、核内レチノイン酸受容体のRAR(α)/RXRが結合する応答配列が第1イントロン上に存在することを見出した。

申请人的研究小组此前发现，在人HL-60细胞被视黄酸分化为中性粒细胞的过程中，细胞表面会诱导产生胞外NAD降解酶（NADase），而这种酶活性负责淋巴细胞表面的产生。据透露，它将由CD38进行。在本研究中，我们研究了细胞表面新的功能分子CD38以及相关的嘌呤核苷酸代谢酶的生理功能、酶化学性质和转录调控机制，并得到了以下发现。。 1.当用属于IgG_1亚类的抗CD38单克隆抗体刺激淋巴细胞时，细胞内多种功能蛋白被酪氨酸磷酸化，这种效果是由于CD38抗体的Fc部分刺激FcγII受体的结果。。 2.采用大鼠脑原代培养方法，分离各种胶质细胞和神经元，并分析大鼠CD38的定位，结果发现CD38在星形胶质细胞上强烈表达，并且发现CD38在细胞表面显着表达。观察到活性。此外，使用共焦激光显微镜观察发现，星形细胞中的CD38具有簇状结构，并且在添加底物NAD后内化到细胞中。 3. 除了CD38之外，这些淋巴细胞和神经系统的细胞表面上还有一种类似PC-1的酶（磷酸酶/磷酸二酯酶）活性，其使用核苷酸作为底物，并且其中一些酶表现出分泌特性。 4.我们确定了预测的分泌型PC-1的N端序列并确定了加工位点。 5.我们分析了人类CD38基因的基因表达，发现第一个内含子上存在与核视黄酸受体RAR(α)/RXR结合的反应元件。