膵癌切除後のAdjuvant Cytokine Gene Therapy-ハムスター膵管癌を用いた基礎的研究-

胰腺癌切除后的辅助细胞因子基因治疗 - 使用仓鼠胰腺导管癌的基础研究 -

• 批准号: 09877246
• 负责人: 田中 雅夫
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877246/
• 关键词: GM-CSF; IFN-γ; MCP-1; 遺伝子治療; アデノウイルス; 膵癌; ハムスター

我々は予後が極めて不良な膵癌に対する免疫遺伝子治療に取り組んでおり、これまでに以下の成果をあげた。(1)in vitroにおけるサイトカイン発現の確認:ハムスター膵癌細胞に各組換えウイルス(IFN-γ、GM-CSF,MCP-1)をMOI 0、10、50、100の感染効率で感染させ毎日、7日後まで上清を採集、ELISAにてサイトカインの放出量を測定した、各サイトカインはMOI依存性に腫瘍細胞より放出され、3目目に最高レベルで放出され1週間後には極少量となった。(2)放出されるサイトカインの生物学的測定:IFN-γはvesicular stomatitis virus plaque inhibition assay, GM-CSFはマウス骨髄細胞を用いたcolony forming assay,MCP-1に対してはTHP-1 細胞(human monocyte)を用いた。chemotaxis assayにより測定した。放出された各サイトカインは生物学的活性をもつことが証明された。(3)in vitroにおける腫瘍増殖:24穴プレートの各wellに2x10^3個の細胞をまき2日後にウイルスをMOI0,10,50,100で感染させ細胞数を各群3穴ずつ、24時間おきに4日後まで計測した。IFN-γのみ腫瘍増殖をMOI依存性に抑制した。(4)in vivoにおける腫瘍増殖:6穴プレートに各ウェル1x105の腫瘍細胞をまき2日後にウイルスをMOI 100の感染効率で感染させ2時間後に100Gyのγ線照射を行い、その翌日ハムスターに腫瘍ワクチンとし1x10^6個の細胞を皮下に注入(n=10)、7日後に1x10^5個のγ線照射を行っていない腫瘍細胞を皮下にチャレンジした。腫瘍ワクチンの実験系においては、GM-CSFが1ヶ月後に95%の抗腫瘍効果を及ぼした。MCP-1及びIFN-γは効果が認められなかった。皮下移植腫瘍にてGM-CSFに抗腫瘍効果が認められたので、in vivoでの肝転移に対する効果についてGM-CSF遺伝子組換えウイルスを用いて現在検討中である。

我们正在致力于针对预后极差的胰腺癌的免疫基因治疗，目前已取得以下成果。 (1)体外细胞因子表达的确认：用各重组病毒(IFN-γ、GM-CSF、MCP-1)以MOI 0、10、50、100的感染效率感染仓鼠胰腺癌细胞。收集至1天后，通过ELISA测量细胞因子的释放量，每种细胞因子以MOI依赖性方式从肿瘤细胞中释放，第3天释放最高水平，1周后释放量非常小。 (2)释放的细胞因子的生物学测量：IFN-γ通过水疱性口炎病毒空斑抑制测定法测定，GM-CSF通过使用小鼠骨髓细胞的集落形成测定法测定，MCP-1通过THP-1细胞(人单核细胞）。通过趋化性测定进行测量。释放的每种细胞因子均被证明具有生物活性。 (3)体外肿瘤生长：24孔板每孔接种2x10^3个细胞，2天后，以0、10、50、100的MOI感染病毒，细胞数为每组增加 3 个孔，每 24 小时进行一次测量，直到 4 天后。只有 IFN-γ 以 MOI 依赖性方式抑制肿瘤生长。 (4)体内肿瘤生长：6孔板每孔接种1x105个肿瘤细胞，2天后以MOI 100的感染效率感染病毒。2小时后，100Gy的γ射线照射进行，第二天，给感染肿瘤的仓鼠皮下注射1x10^6个细胞作为疫苗（n=10），7天后，皮下注射1x10^5个未经伽马射线照射的肿瘤细胞。挑战。在实验性肿瘤疫苗系统中，GM-CSF在一个月后发挥出95%的抗肿瘤功效。没有观察到 MCP-1 和 IFN-γ 的影响。由于在皮下移植肿瘤中观察到 GM-CSF 的抗肿瘤作用，我们目前正在使用 GM-CSF 重组病毒研究其对体内肝转移的影响。