iPS細胞のエクソソームを用いたT細胞制御による自己免疫疾患の新規治療法開発

使用 iPS 细胞外泌体通过 T 细胞控制开发自身免疫性疾病的新治疗方法

基本信息

批准号：
22K10221
负责人：
緒方謙一
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

1. iPS細胞作製についてロンザ社より購入したヒト歯髄幹細胞をメーカー指定の専用培地で80%コンフルエントになるまで培養した。細胞を回収した後、プラスミドDNA （Oct3/4、Sox2、Klf4、c-MycおよびDsRed）（OPTI-MEMTMI : Invitrogen社）を作用させたのち、PLAT-E 細胞に滴下し培養した。培養11目からpuromycin 選択を開始し、歯髄幹細胞由来のiPS細胞を3種類樹立した（iPS 1, iPS 2, iPS 3と定義）。また、未分化性の確認については、Oct3/4およびSSEA-4による蛍光免疫染色を施行した。2.iPS細胞からエクソソーム（EVs）回収について樹立した3種類のiPS細胞からEVs回収にあたっては、Cellartis; DEF-CS8482; 500 Culture System（タカラバイオ株式会社）を使用した。培養方法については、過去の報告に準じて行った。80%コンフルエント時にCellartis; MSC Xeno-Free Culture Medium（タカラバイオ株式会社）に培地交換し、48時間後にCMを回収した。回収したCMを超遠心機（himac CP80NX：日立工機）を用いて4℃、100000 × gで70分間超遠心した。これを4回繰り返したのち、PBSに再懸濁し、実験使用まで－80℃で保存した。れらのEVsの形態と表面マーカーを調べたところ、EVsの大きさはともに200 nm前後であり、表面マーカーはCD9, CD81をともに認めた（図1b）。よって、樹立したiPS細胞は未分化性を有し、かつ細胞能力に差があることが示された。また、それらからのEVsは大きさや表面マーカーに違いは認められなかった。

1. 关于iPS细胞的生产从Lonza购买的人牙髓干细胞在制造商指定的专用培养基中培养直至达到80%汇合。收集细胞后，用质粒DNA(Oct3/4、Sox2、Klf4、c-Myc和DsRed)(OPTI-MEMTMI：Invitrogen)处理，然后将其滴加到PLAT-E细胞中并培养。从第11个培养点开始进行嘌呤霉素选择，建立了来自牙髓干细胞的三种类型的iPS细胞（定义为iPS 1、iPS 2和iPS 3）。另外，为了确认未分化状态，进行了Oct3/4和SSEA-4的荧光免疫染色。 2.从iPS细胞中回收外泌体(EV) 使用Cellartis；500培养系统(Takara Bio Inc.)从建立的三种类型的iPS细胞中回收EV。培养方法按照以往报道进行。在80％汇合时，将培养基替换为Cellartis；MSC Xeno-Free培养基(Takara Bio Inc.)，并在48小时后收集CM。使用超速离心机（HIMAC CP80NX：Hitachi Koki）将收集的 CM 在 4℃、100,000 × g 下超速离心 70 分钟。重复四次，然后重悬于 PBS 中并保存在 -80°C 直至实验使用。当我们检查这些 EV 的形态和表面标记时，我们发现两个 EV 的尺寸约为 200 nm，表面标记为 CD9 和 CD81（图 1b）。因此，表明建立的iPS细胞具有未分化的特性并且具有不同的细胞能力。此外，没有观察到它们的电动汽车的尺寸或表面标记存在差异。

项目成果

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专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

The Therapeutic Potential of Secreted Factors from Dental Pulp Stem Cells for Various Diseases

牙髓干细胞分泌因子对多种疾病的治疗潜力

DOI：
10.3390/biomedicines10051049
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
4.7
作者：
Ogata Kenichi;Moriyama Masafumi;Matsumura;Kawado Tatsuya;Yano Aiko;Nakamura Seiji
通讯作者：
Nakamura Seiji

ェーグレン症候群モデルマウスにおけるヒト歯髄幹細胞エクソソームの効果の検討

检查人牙髓干细胞外泌体对哈格伦综合征模型小鼠的影响

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
川戸　達也;緒方　謙一;森山　雅文;川島　万由;矢野　亜衣子;中村　誠司
通讯作者：
中村　誠司

Impaired GATE16-mediated exocytosis in exocrine tissues causes Sj?gren’s syndrome-like exocrinopathy

外分泌组织中 GATE16 介导的胞吐作用受损导致干燥综合征样外分泌病

DOI：
10.1007/s00018-022-04334-x
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
8
作者：
Suzuki Akiko;Iwaya Chihiro;Ogata Kenichi;Yoshioka Hiroki;Shim Junbo;Tanida Isei;Komatsu Masaaki;Tada Norihiro;Iwata Junichi
通讯作者：
Iwata Junichi

OLP上皮由来カテプシンKはTLR9陽性形質様樹状細胞によるTh17免疫応答を促進する

OLP 上皮源性组织蛋白酶 K 通过 TLR9 阳性血浆树突状细胞促进 Th17 免疫反应