Elucidation of glycan structures in tumor antigens using high-density lectin arrays

使用高密度凝集素阵列阐明肿瘤抗原中的聚糖结构

• 批准号: 21H03009
• 负责人: 和田 聡
• 金额: $ 11.15万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H03009/
• 关键词: 腫瘍抗原; がん免疫療法; 糖鎖構造; CAR-T; レクチンアレイ解析; 糖蛋白; レクチンアレイ

キメラ抗原受容体遺伝子導入T細胞療法（CAR-T療法）は有望ながん免疫療法として注目され、血液がんにおいて高い抗腫瘍効果が認められた。一方、固形がんでは明らかな抗腫瘍効果はまだ認めていない。その原因として標的抗原が少ないことが挙げられる。申請者はこれまでに固形がんの根幹に関わる分子としてPIGRを同定した。PIGRは腫瘍細胞で強い発現が見られるが、一方で一部の正常細胞でも発現が認められる。そこで本研究では、正常細胞と腫瘍細胞を究極的に見分ける方法を確立するために、正常細胞と腫瘍細胞でのPIGR上の糖鎖構造の相違について検討を行った。糖鎖解析は非常に複雑であり、遺伝子解析における次世代シーケンサーのような手軽に解析できるツールがないため開発が進んでいないが、本研究では世界最先端のグライコーム解析を用いて、正常細胞と腫瘍細胞におけるPIGR上の糖鎖構造について解析を行った。膵臓がん腫瘍組織検体（90症例）を用いたPIGRの免疫染色の解析結果から、膵臓がん腫瘍組織11検体分において正常腸管細胞と腫瘍細胞の両方にPIGR分子の発現を認めた。そこで、この膵臓がん腫瘍組織11検体を用いて正常腸管細胞及び腫瘍細胞をレーザーマイクロダイゼクション法(LMD法)を用いて分離した。次に分離した細胞のPIGR分子を免疫沈降にて単離してそれぞれレクチンアレイ解析を行った。その解析により一部正常細胞と腫瘍細胞上の糖鎖を認識するレクチンの相違を認めた。現在更なる解析を行っている。また、PIGR分子に対する抗体作製にも着手しており、抗原ワクチン後の抗体を採取し、ハイブリドーマを作製中であるが良い抗体が取れていないのが現状である。抗体作製委託も並行して行っている。今後作製した抗体が認識する糖タンパクについて解析を行う。

嵌合抗原受体基因转基因T细胞疗法（CAR-T疗法）吸引了人们的注意，作为一种有希望的癌症免疫疗法，并被发现在血液学癌症中具有很高的抗肿瘤作用。另一方面，在固体癌症中未观察到明显的抗肿瘤作用。这是由于靶抗原数量较少。申请人先前已将PIGR确定为参与潜在固体癌的分子。 PIGR在肿瘤细胞中强烈表达，但在某些正常细胞中也表达。因此，在这项研究中，我们研究了正常细胞和肿瘤细胞之间的pIGR的聚糖结构的差异，以建立一种最终区分正常细胞和肿瘤细胞的方法。糖基化非常复杂，并且尚未开发，因为没有简单的工具可以分析诸如遗传分析中的下一代序列。但是，在这项研究中，我们使用世界上最先进的糖酮分析分析了正常和肿瘤细胞中PIGR的聚糖结构。使用胰腺癌肿瘤组织样品（90例）对PIGR免疫染色的分析表明，在11个胰腺癌肿瘤组织标本中，在正常肠细胞和肿瘤细胞中表达了pIGR分子。因此，使用激光显微镜（LMD）使用胰腺癌肿瘤组织的11个样本分离正常的肠细胞和肿瘤细胞。接下来，通过免疫沉淀分离来自分离细胞的PIGR分子，并对它们进行了凝集素阵列分析。该分析表明，凝集素之间识别某些正常细胞和肿瘤细胞上的聚糖的凝集素之间的差异。目前正在进行进一步的分析。我们还开始生产针对PIGR分子的抗体，目前正在抗原疫苗后收集抗体以产生杂交瘤，但目前我们无法获得良好的抗体。抗体的产生也同时外包。将对未来产生的抗体识别的糖蛋白进行分析。