リンパ浮腫治療のための脂肪間質細胞改変型”Designer Cells”の開発

开发用于治疗淋巴水肿的改良脂肪基质细胞类型“Designer Cells”

基本信息

批准号：
22K09885
负责人：
市瀬多恵子
金额：
$ 2.66万
依托单位：
University of the Ryukyus
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

がん治療で生じる2次性リンパ浮腫は患者のQOLを著しく低下させるが、対症療法に大きく依存しており、低侵襲で高度な外科技術を要しない根本的治療法の開発が求められている。本研究では、機能的なリンパ管の再生、炎症の抑制、線維化の抑制を同時に図るマルチモーダルな治療法として、脂肪間質細胞移植に着目する。採取や増幅が容易で自家移植に適した脂肪間質細胞をベースとして、術後患部におけるリンパ管内皮細胞とその周辺組織へのパラクライン効果を高めた”Designer Cells”を、遺伝子改変技術を用いて作製する。リンパ管内皮細胞の増殖・管腔形成・内皮間葉移行などを指標としたin vitroのアッセイ系でDesigner Cellsの開発を進め、リンパ浮腫モデルマウスを用いてその治療効果について検討する。今年度は、Designer Cells作成のための準備を行った。ヒト脂肪間質細胞の場合と比較して、マウス脂肪間質細胞は少ない分裂回数で細胞増殖の遅延・停止が起こるため、マウステロメラーゼ逆転写酵素(mTERT ; Mouse Telomerase Reverse Transcriptase)や、増殖を促進するドライバー遺伝子を脂肪間質細胞に発現させ、不死化マウス脂肪間質細胞の樹立を行った(mADSCmT)。初代培養のマウス脂肪間質細胞は、3週以降、増殖速度が遅くなるのに対し、樹立したmADSCmT細胞は、80日を超えて増殖速度を維持して培養可能であり、脂肪細胞への分化能も保持していた。リンパ管内皮細胞の増殖や性質維持に有利となる増殖因子等の発現ベクターの作成を行い、mADSCmT細胞への遺伝子導入を行った。発現させたタンパク質が十分に発現していることが確認できたので、今後、リンパ管内皮細胞への効果を検討する予定である。

癌症治疗引起的继发性淋巴水肿显着降低患者的生活质量，但严重依赖对症治疗，需要开发微创且不需要先进手术技术的根治治疗方法。在这项研究中，我们重点关注脂肪基质细胞移植作为一种多模式治疗，同时旨在再生功能性淋巴管、抑制炎症和抑制纤维化。我们以易于采集、扩增、适合自体移植的脂肪基质细胞为基础，利用基因改造技术打造出“Designer Cells”，对术后患处的淋巴内皮细胞和周围组织具有增强的旁分泌作用。它。我们将利用体外检测系统，利用淋巴内皮细胞增殖、管形成和内皮间质转化等指标，继续开发Designer Cells，并使用淋巴水肿模型小鼠检查其治疗效果。今年，我们准备创建设计师细胞。与人类脂肪基质细胞相比，小鼠脂肪基质细胞需要更少的分裂来延迟或停止细胞增殖，我们在脂肪基质细胞中表达了用于此目的的驱动基因，并建立了永生化小鼠脂肪基质细胞（mADSCmT）。虽然原代培养的小鼠脂肪基质细胞的增殖速度在3周后减慢，但建立的mADSCmT细胞可以培养保持其增殖速度超过80天，并且不能分化为脂肪细胞，他还保持了他的Noh技能。我们制作了有利于淋巴管内皮细胞增殖和维持的生长因子等表达载体，并将其导入mADSCmT细胞中。由于我们能够确认表达的蛋白质已充分表达，因此我们计划在未来研究其对淋巴内皮细胞的影响。