リンパ管におけるホメオボックス転写因子Proxlの機能解析

淋巴管同源框转录因子Proxl的功能分析

基本信息

批准号：
17790255
负责人：
市瀬多恵子
金额：
$ 1.98万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790255/
关键词：
リンパ管マウス Proxl Prox1

项目摘要

Proxlの発現誘導が可能な遺伝子導入マウス(CGPマウス)とCAG-Creマウスを交配し、Prox-1の全身性発現の影響について解析したところ、ダブルトランスジェニックマウス(dTgマウス)は、胎生11.5日までには死亡するが、PECAM-1抗体を用いたホールマウント免疫染色の結果では、血管形成に顕著な異常は見られなかった。また、CGPマウスとTie2-Creマウスを交配し、血管内皮でのProx-1の強制発現の影響について解析したところ、dTgマウスは、メンデルの法則から予想される数より少ないものの、出生し、8週齢までに死亡することが分かった。出生後1日目のCGP/Tie2-Cre dTgマウスの小腸を、PECAM1およびLYVE1に対する抗体を用いて免疫染色を行ったが、血管・リンパ管の形成に顕著な異常は見られなかった。本研究では、Proxlが、血管内皮細胞からリンパ管内皮細胞への分化を一意的に決定するわけではないことが示唆されたが、致死の原因や機序は不明であり、更なる解析の必要性が考えられた。一方、変異型SV40 large T抗原を内皮細胞で発現する遺伝子導入マウスから、成体の内皮細胞を効率良く分離、培養可能であることが所属研究室において示されていたことから、当該マウスを用いた胎生期の内皮細胞の分離、培養を試みた。その結果、PECAM-1・VEGFR-2陽性、Lyve-1陰性の血管内皮細胞と、PECAM-1・Lyve-1・Proxl陽生のリンパ管内皮細胞の分離、培養に成功した。CGPマウスと組み合わせることで、Proxlを過剰発現する胎生期血管内皮の性質をin vitroで解析するために有効であると考えられた。

当能够诱导Proxl表达的转基因小鼠（CGP小鼠）和CAG-Cre小鼠杂交并分析Prox-1的全身表达的影响时，双转基因小鼠（dTg小鼠）然而，使用PECAM-1抗体的整体免疫染色未发现血管形成明显异常。此外，当CGP小鼠和Tie2-Cre小鼠杂交并分析Prox-1在血管内皮中强制表达的影响时，dTg小鼠诞生了，尽管数量比基于孟德尔定律的预期要少，并且有8只结果发现，婴儿在一周内死亡。我们使用针对 PECAM1 和 LYVE1 的抗体对 CGP/Tie2-Cre dTg 小鼠出生后第一天的小肠进行免疫染色，但在血管和淋巴管的形成中未观察到明显异常。这项研究表明，Proxl 并不能唯一决定血管内皮细胞向淋巴内皮细胞的分化，但致死的原因和机制仍不清楚，需要进一步分析。另一方面，我们的实验室已经证明，可以从内皮细胞中表达突变型SV40大T抗原的转基因小鼠中有效地分离和培养成体内皮细胞，因此我们尝试使用这些小鼠来分离和培养胚胎。内皮细胞。结果，我们成功分离培养了PECAM-1/VEGFR-2阳性、Lyve-1阴性血管内皮细胞和PECAM-1/Lyve-1/Proxl阳性淋巴管内皮细胞。与CGP小鼠结合，它被认为对于体外分析过度表达Proxl的胚胎血管内皮的特性是有效的。