内耳血液迷路関門の透過性制御に基づく薬剤性難聴の予防手段の樹立

基于内耳血迷路屏障渗透性控制的药物性听力损失预防措施的建立

• 批准号: 22K09702
• 负责人: 西尾 綾子
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09702/
• 关键词: 薬剤性難聴; 血液迷路関門; 内耳

マウス血液迷路関門（BLB）の成立時期の確認から開始した。日齢6（P6）からP21までのC57BL/6J野生型マウスにPBSまたはFM 1-43 dyeを皮下注射し、24時間後に安楽死させた。内耳を取り出し固定したのち、蝸牛感覚上皮を取り出して、有毛細胞を抗Myosin VI抗体と蛍光標識二次抗体で標識した。FM dyeの有毛細胞への取込は、P11からP14の間で急激に減少したことから、この期間にBLBが成立するものと考えられた。Texas Redで標識したゲンタマイシン（GTTR）でも、同様の実験を行い、全身投与したGTTRの有毛細胞への移行量は、上記のBLB成立以降に急激に減少することを確認した。次に、BLB成立後のマウスにおいて、lipopolysaccharide（LPS）誘発性炎症によるBLB透過性の変化を調べた。4-8週齢のC57BL/6J野生型マウスにPBSまたはLPSを静注し、24時間後にPBSまたはGTTRを皮下注射して、さらに24時間経過した時点で安楽死させ、内耳を取り出し固定したのち、蝸牛感覚上皮を取り出して、有毛細胞を抗Myosin VI抗体と蛍光標識二次抗体で標識した。LPS投与によりGTTRの有毛細胞への移行量が増加することが確認された。この結果より、LPS投与によりBLBの透過性が亢進したものと推測された。続いて、アミノグリコシドであるカナマイシンの全身投与により出現する難聴が、LPS投与により増悪するか確認する実験を開始した。現在、カナマイシンおよびLPSの適当な投与量および投与期間について検討中である。

我们首先确认小鼠血迷路屏障（BLB）建立的时间。从第6天(P6)到P21的C57BL/6J野生型小鼠皮下注射PBS或FM 1-43染料，并在24小时后安乐死。取出内耳并固定后，去除耳蜗感觉上皮，用抗肌球蛋白VI抗体和荧光标记二抗标记毛细胞。由于毛细胞对 FM 染料的摄取在 P11 和 P14 之间迅速减少，因此认为 BLB 是在这一时期建立的。使用德克萨斯红标记的庆大霉素(GTTR)进行了类似的实验，并且证实了在上述BLB建立后，转移至毛细胞的全身施用的GTTR的量迅速减少。接下来，我们检查了 BLB 建立后由于脂多糖 (LPS) 诱导的小鼠炎症引起的 BLB 通透性变化。对4至8周龄的C57BL/6J野生型小鼠静脉注射PBS或LPS，24小时后皮下注射PBS或GTTR，再过24小时，将其安乐死，并摘除内耳。并固定，去除耳蜗感觉上皮，用抗肌球蛋白VI抗体和荧光标记二抗标记毛细胞。已证实LPS施用增加了转移至毛细胞的GTTR量。由此结果推测，通过给予LPS，BLB渗透性增强。接下来，我们开始了一项实验，以确认全身给予氨基糖苷类卡那霉素引起的听力损失是否会因给予脂多糖而加剧。我们目前正在研究卡那霉素和脂多糖的适当剂量和持续时间。