内耳細胞死由来エクソソーム・DAMPsが海馬の空間情報処理に及ぼす影響の解明

阐明内耳细胞死亡产生的外泌体和 DAMP 对海马空间信息处理的影响

• 批准号: 22K09674
• 负责人: 林 賢
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09674/
• 关键词: 内耳細胞老化; オートファジー; SASP; 酸化ストレス; 内耳細胞死; エクソソーム; DAMPs; 老化ミクログリア

内耳細胞障害が、時空間認識能・記憶に与える直接的影響の分子レベルでの解明をするため、先ず内耳細胞老化モデル構築を試みた。その際、内耳培養細胞HEI-OC1を、酸化ストレス誘導剤である亜ヒ酸ナトリウム（NaAsO2）によって短時間曝露（100，250，500μM 1h）し、細胞生存率は保持された状態で内耳細胞増殖率は低下する内耳細胞老化誘導最適化条件（500μM 1h、0-48h）を確定した。この条件にて、細胞老化マーカーであるSA-βgal陽性細胞数は、vehicleと比較して有意に増加したことを確認した。細胞老化表現型の一つである細胞周期停止を確認するため、細胞周期阻害因子 p21, p16 をコードするCdkn1aとCdkn2aの mRNA 発現を解析した。NaAsO2 曝露 24 時間後では、Cdkn1a の mRNA 発現量が増加したが、Cdkn2a の mRNA 発現量は不変であった。p21もNaAsO2 曝露により増加することが示された)。次に、DNA の二重鎖切断のマーカーとして知られるリン酸化ヒストン H2AX (γH2AX) の免疫染色によりγH2AXタンパク質を標識すると、NaAsO2 曝露後に核内でのDNA 二重鎖切断を示すフォーカス数が増加していることを確認された。NaAsO2曝露後のHEI-OC1 細胞においても平坦化と膨隆化を特徴とする形態変化が見られた。さらに、老化随伴分泌因子 (Senescence-associated secretory phenotype ; SASP)関連遺伝子IL-6, IL-1β、CXCL10の発現亢進も認められた。これらの結果から、内耳培養細胞を NaAsO2に曝露すると、DDR及び増殖停止が起こり、複数の細胞老化表現型を呈することが示された。

为了从分子水平阐明内耳细胞损伤对时空认知能力和记忆力的直接影响，我们首先尝试构建内耳细胞衰老模型。此时，将培养的内耳细胞HEI-OC1短时间暴露于氧化应激诱导剂亚砷酸钠（NaAsO2）（100、250、500μM，1小时），内耳细胞在增殖的同时确定了诱导内耳细胞衰老的优化条件（500 μM 1 小时，0-48 小时）以降低速率。在这些条件下，证实了与载体相比，作为细胞老化标记物的SA-βgal阳性细胞的数量显着增加。为了确认细胞周期停滞（细胞衰老表型之一），我们分析了编码细胞周期抑制因子 p21 和 p16 的 Cdkn1a 和 Cdkn2a 的 mRNA 表达。 NaAsO2暴露24小时后，Cdkn1a mRNA表达增加，但Cdkn2a mRNA表达保持不变。 p21 也显示出在 NaAsO2 暴露后增加）。接下来，我们通过磷酸化组蛋白H2AX（γH2AX）（已知的DNA双链断裂标记物）的免疫染色来标记γH2AX蛋白，并且证实NaAsO2暴露后细胞核中显示DNA双链断裂的病灶数量增加。 NaAsO2 暴露后，HEI-OC1 细胞中也观察到以扁平和肿胀为特征的形态变化。此外，还观察到衰老相关分泌表型（SASP）相关基因 IL-6、IL-1β 和 CXCL10 的表达增加。这些结果表明，培养的内耳细胞暴露于 NaAsO2 会导致 DDR 和生长停滞，并表现出多种细胞衰老表型。

项目成果

Exosomal miRNA let-7b modulates the interaction between TLR7 and TRPA1, inducing hyperexcitability-induced cell death in auditory cell

外泌体 miRNA let-7b 调节 TLR7 和 TRPA1 之间的相互作用，诱导听觉细胞过度兴奋诱导的细胞死亡

• 发表时间: 2022
• 作者: Ken Hayashi; Hideaki Sakata
• 通讯作者: Hideaki Sakata

Fine-tuned cholesterol solubilizer, mono-6-O-α-D-maltosyl-γ-cyclodextrin, ameliorates experimental Niemann?Pick disease type C without hearing loss

微调胆固醇增溶剂，单-6-O-α-D-麦芽糖基-γ-环糊精，改善实验性尼曼？皮克病 C 型但无听力损失

• DOI: 10.1016/j.biopha.2022.113698
• 发表时间: 2022
• 影响因子: 7.5
• 作者: Yamada Y; Miwa T; Nakashima M; Shirakawa A; Ishii A; Namba N; Kondo Y; Takeo T; Nakagata N; Motoyama K; Higashi T; Arima H; Kurauchi Y; Seki T; Katsuki H; Okada Y; Ichikawa A; Higaki K; Hayashi K; Minami K; Yoshikawa N; Ikeda R; Ishikawa Y; Kajii T; Tachi
• 通讯作者: Tachi

TFEBによるオートファジー・リソソーム経路活性化を介した内耳細胞老化制御メカニズムの解明

阐明TFEB激活自噬-溶酶体途径调节内耳细胞衰老的机制

• 发表时间: 2022
• 作者: 林 賢