エクソソーム解析による治療抵抗性腎癌の新規治療戦略と治療効果予測マーカーの開発

利用外泌体分析开发难治性肾癌的新治疗策略和治疗效果预测标记物

• 批准号: 22K09507
• 负责人: 鑪野 秀一
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09507/
• 关键词: エクソソーム; 腎細胞癌; microRNA-1; MYO15A; 腎癌

今年度は、エクソソームmiR-1の機能と、エクソソームがRCCにおける腫瘍メーカーを構成する可能性について検討した。まず、スピンカラムを用いた方法により、細胞溶解液とヒト血清からエクソソームを回収する方法を確立した。次に、Nanosightのナノ粒子追跡解析とエクソソームマーカーCD63を用いたウェスタンブロット解析により、エクソソームを評価した。その結果、PKH26で標識したエクソソームがレシピエント細胞と融合することを確認した。さらに、miR-1を導入した細胞由来のエクソソームで処理したRCC細胞では、miR-1の発現が上昇した。機能解析の結果、エクソソームmiR-1はコントロールと比較して、細胞の増殖、移動、浸潤を有意に抑制することが示された。また、RCCに関するTCGAデータベースを用いた解析では、臨床RCCサンプルでは正常腎臓サンプルと比較してmiR-1発現が有意に低下しており、miR-1発現が低い患者は高い患者と比較して全生存期間が短いことが示された。さらにRNAシーケンス解析により、エクソソームmiR-1への曝露により、いくつかの遺伝子の発現レベルが変化することが示された。TCGAデータベースを用いた解析では、RCCにおいてMYO15Aの高発現群ではより悪い転帰と関連することが示された。また臨床患者の血清から採取したエクソソームのRT-qPCR解析により、MYO15Aは健常対照と比較してRCC患者で有意に発現が上昇することが示された。この研究により、エクソソームmiR-1による治療がRCCの治療に有効なアプローチとなる可能性が示された。また、エクソソームMYO15AはRCCの診断用腫瘍マーカーとなる可能性も示唆された。

今年，我们研究了外泌体 miR-1 的功能以及外泌体构成 RCC 肿瘤标志物的可能性。首先，我们建立了一种使用旋转柱从细胞裂解物和人血清中回收外泌体的方法。接下来，使用 Nanosight 纳米颗粒跟踪分析和使用外泌体标记 CD63 的蛋白质印迹分析来评估外泌体。结果，我们证实了 PKH26 标记的​​外泌体与受体细胞融合。此外，用来自 miR-1 转染细胞的外泌体处理的 RCC 细胞中 miR-1 表达增加。功能分析表明，与对照相比，外泌体 miR-1 显着抑制细胞增殖、迁移和侵袭。此外，利用TCGA数据库对RCC进行分析显示，与正常肾脏样本相比，临床RCC样本中miR-1表达量显着降低，且miR-1低表达患者的总体表达量低于miR-1高表达患者表明生存期很短。此外，RNA-seq 分析表明，暴露于外泌体 miR-1 会改变多个基因的表达水平。使用 TCGA 数据库的分析表明，MYO15A 高表达与 RCC 预后较差相关。此外，对从临床患者血清中收集的外泌体进行的 RT-qPCR 分析表明，与健康对照相比，RCC 患者中的 MYO15A 表达显着增加。这项研究表明，外泌体 miR-1 治疗可能是治疗 RCC 的有效方法。还提出外泌体 MYO15A 可以作为 RCC 的诊断肿瘤标志物。

项目成果

Exosomal microRNA-1 and MYO15A as a target for therapy and diagnosis in renal cell carcinoma

外泌体 microRNA-1 和 MYO15A 作为肾细胞癌治疗和诊断的靶点

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2022.09.056
• 发表时间: 2022
• 影响因子: 3.1
• 作者: Yoshino Hirofumi;Tatarano Shuichi;Tamai Motoki;Tsuruda Masafumi;Iizasa Sayaka;Arima Junya;Kawakami Issei;Fukumoto Wataru;Kawahara Ichiro;Li Gang;Sakaguchi Takashi;Inoguchi Satoru;Yamada Yasutoshi;Enokida Hideki
• 通讯作者: Enokida Hideki