Examination of the effect of combination therapy of galectin-9 and epigallocatechin gallate on hepatocellular carcinoma

半乳糖凝集素9与表没食子儿茶素没食子酸酯联合治疗肝细胞癌的疗效观察

基本信息

批准号：
22K08078
负责人：
正木勉
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kagawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

緑茶に含まれるエピガロカテキンガレート（以下：EGCG）は疫学的に癌の発生予防効果が報告されており、ある種の癌細胞の抑制効果も報告されている。しかしながら肝癌の分子標的治療薬Lenvatinib、Sorafenib耐性癌細胞株に対するEGCGの効果は明らかではない。そのような耐性癌細胞を含む肝癌細胞株におけるEGCGの抗腫瘍効果について基礎的解析をした。【方法】（１）2種類の肝癌細胞株HuH-7、Hep3Bを用いて培養液中にLenvatinib、Sorafenibの濃度を1μMから10μMまで添加した。生存細胞のみをセレクションし、耐性肝癌細胞株を作成しIC50値の薬剤濃度を確認した。（２）耐性株におけるEGCGの細胞増殖抑制効果をMTT assayで解析した。（３）EGCGの抗腫瘍作用の効果に関連するmicroRNAを2563遺伝子が搭載されたアレイチップを用い網羅的に解析した。さらにLenvatinib、Sorafenib耐性肝癌細胞株Hep3Bをヌードマウスの皮下に移植し、EGCGを腹腔内に投与し、抗腫瘍効果を検討した。【成績】Hep3Bの野生株及びLenvatinib耐性株における48時間後のIC50値はそれぞ4.0μM、92.7μMであった。またHep3Bの野生株及びSorafenib耐性株ではそれぞれ2.0μM、11.4μMであり、それぞれの薬剤の耐性株を樹立した。Hep3B全ての細胞株においてEGCGの濃度依存的に細胞増殖抑制効果を示した。しかしながらHuH-7においては効果を示さなかった。また、EGCG投与前後にHep3BのmicroRNAは明瞭なクラスターを形成し、EGCG投与により抗腫瘍効果に関連するmicroRNA分子を見いだした。In vivoの解析においてもLenvatinib、Sorafenib耐性株に対する抗腫瘍効果を示した。

据流行病学报道，绿茶中含有的表没食子儿茶素没食子酸酯（以下简称EGCG）可有效预防癌症的发展，并且还报道对某些癌细胞具有抑制作用。然而，EGCG对肝癌分子靶向治疗乐伐替尼和索拉非尼耐药的癌细胞系的影响尚不清楚。我们对EGCG对包括此类耐药癌细胞在内的肝癌细胞系的抗肿瘤作用进行了基础分析。 [方法] (1)使用HuH-7和Hep3B两种肝癌细胞系，将Lenvatinib和Sorafenib以1μM至10μM的浓度添加到培养基中。仅选择活细胞，创建耐药性肝癌细胞系，并确认以IC50值表示的药物浓度。 (2)MTT法分析EGCG对耐药菌株的细胞增殖抑制作用。 (3)利用搭载2563个基因的阵列芯片对与EGCG抗肿瘤作用相关的MicroRNA进行综合分析。此外，将Lenvatinib和Sorafenib耐药的肝癌细胞系Hep3B皮下移植到裸鼠体内，并腹腔注射EGCG以检查抗肿瘤效果。【结果】Hep3B野生株和乐伐替尼耐药株48小时后的IC50值分别为4.0μM和92.7μM。此外，Hep3B野生株和索拉非尼耐药株的浓度分别为2.0μM和11.4μM，并建立了对每种药物的耐药株。所有Hep3B细胞系均表现出EGCG浓度依赖性的细胞增殖抑制作用。然而，在HuH-7中没有显示出效果。此外，Hep3B microRNA在施用EGCG之前和之后形成了不同的簇，并且通过EGCG施用发现了与抗肿瘤作用相关的microRNA分子。体内分析还显示出对乐伐替尼和索拉非尼耐药菌株的抗肿瘤作用。