Detection of ALS origin with reference to calcium-binding proteins, those generate glial inflammation

参考钙结合蛋白检测 ALS 起源，这些蛋白会产生神经胶质炎症

基本信息

批准号：
22K07517
负责人：
林信太郎
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

①研究計画書に基づき、カルシウム結合蛋白 (カルビンディン, CB; カルレチニン, CR; パルブアルブミン, PV)によるグリア性炎症惹起性の検証を以下の方法で行った。マウス株化ミクログリア6-3細胞 (COSMO BIO Co.LTD)を96ウェルプレートに播種した後、培養液にエンドトキシンフリーであることを確認したリコンビナント蛋白、CB、CR、PV (0, 1, 10, 100 nM)を添加しday1-3の各培養上清に含まれる17種類のケモカイン/サイトカイン（CXCL1, GM-CSF, IFNγ, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-17A, MCP1, MIP1a, MIP1b, TNF-α）をFirePlex-96 Key Cytokines (Mouse)Immunoassay panel (Abcam, ab235656)で測定した。測定前に各dayにおいて細胞をパラフォルムアルデヒド固定しクリスタルバイオレット染色を行い、細胞の生存を確認した。この結果、測定した全項目の中で100 nM、day3のCR添加群においてMCP1の有意な増加を認めた (測定値は②に示す（pg/ml）。両側t検定；無添加群 vs. 100 nM: p=0.040, 1 nM vs. 100 nM: p=0.033, 10 nM vs. 100 nM: p=0.045)。残り16項目のケモカイン/サイトカインについて有意な変動はなかった。 CB、PV添加群では一部の検体で測定値が得られたがばらつきが大きく判定不可とした。②(無添加群)118.4±21.8,　(1nM)177.6±20.9, (10nM)190.0±25.1, (100nM)328.5±79.2

① 根据研究方案，我们使用以下方法验证了钙结合蛋白（钙结合蛋白，CB；钙视网膜蛋白，CR；小清蛋白，PV）诱导神经胶质炎症的潜力。将小鼠小胶质细胞系6-3（COSMO BIO Co.LTD）接种到96孔板中后，将培养基与重组蛋白、CB、CR、PV（0、1、10、100 nM）和17种类型混合趋化因子/细胞因子（CXCL1、GM-CSF、IFNγ、 IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-12p70、IL-13、IL-17A、MCP1、MIP1a、MIP1b、TNF-α）使用 FirePlex-96 关键细胞因子（小鼠）免疫测定面板（Abcam，ab235656）进行测量。测量前，每天用多聚甲醛固定细胞并用结晶紫染色以确认细胞存活。结果，在所有测量的项目中，在100 nM和第3天的CR添加组中观察到MCP1显着增加（测量值显示在②（pg/ml）中。双尾t检验；非添加组对比 100 nM：p=0.040，1 nM 对比 100 nM：p=0.033，10 nM 对比 100 nM：p=0.045）。其余16种趋化因子/细胞因子没有显着变化。在CB和PV添加组中，获得了一些样品的测量值，但变化较大，无法进行判断。 ②（无添加组）118.4±21.8、（1nM）177.6±20.9、（10nM）190.0±25.1、（100nM）328.5±79.2