Analysis for effects of IgG+ B cell selection machinery on the onset of autoimmue diseases.

分析 IgG B 细胞选择机制对自身免疫性疾病发病的影响。

• 批准号: 22K07130
• 负责人: 疋田 正喜
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Akita University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07130/
• 关键词: B細胞; IgG; SLE; 記憶B細胞; 抗原受容体; シグナル; 自己反応性; アポトーシス

本研究においては、SLE病態形成にParm1の関与の有無を検討することにより、Parm1がSLEに対する創薬ターゲットとなり得るのか否かについて検討することを目的としている。その初期検討として、IgG2a陽性であり、Parm1を恒常的に発現しているA20細胞のParm1遺伝子を欠失させ、Parm1がIgG型BCR依存性のアポトーシスに関与しているのか否かを明らかにすることを試みた。その結果、少なくともBimについては、Parm1欠損A20細胞において、BCRの強架橋によって野生型と比較して発現量がより強く上昇することが明らかとなった。このことは、Parm1がIgG型のBCR依存性のB細胞の選択に関わっていることを強く示唆している。一般的に自己免疫疾患においては、自己反応性のB細胞におけるアポトーシス異常が引き起こされた結果、自己抗体が産生されると考えられていることから、Parm1は事前の期待どおりB細胞の選択異常に関与している可能性が示された。現在、SLEモデルマウスにおけるParm1の発現を詳細に検討しており、来年度以降に、SLEモデルマウスにおけるParm1の役割を明らかにする予定である。また、独自に樹立済みの抗Parm1モノクローナル抗体産生ハイブリドーマについては、無血清培地への馴化が終了したことから、高密度培養を実施中でありin vivo投与が可能となるだけのモノクローナル抗体を大量に得つつある。さらに、ミニスケールでは、当該抗体を精製できるプロトコールを樹立することに成功していることから、今後、大量に抗体を含む培養上清が得られ次第、大スケールでの精製を行う予定である。

本研究的目的是探讨 Parm1 是否参与 SLE 发病机制以及 Parm1 是否可以作为 SLE 的药物发现靶点。作为初步研究，我们将删除 IgG2a 阳性且组成型表达 Parm1 的 A20 细胞中的 Parm1 基因，以阐明 Parm1 是否参与 IgG BCR 依赖性细胞凋亡。结果表明，由于强BCR交联，Parm1缺陷的A20细胞中至少Bim的表达水平比野生型更强烈地增加。这强烈表明Parm1参与了IgG型BCR依赖性B细胞的选择。一般认为，在自身免疫性疾病中，自身抗体是由于自身反应性 B 细胞异常凋亡而产生的，因此 Parm1 在 B 细胞的异常选择中发挥了作用，正如之前所预测的那样，它们可能参与其中。我们目前正在详细研究Parm1在SLE模型小鼠中的表达情况，并计划从明年开始阐明Parm1在SLE模型小鼠中的作用。此外，自主建立的抗Parm1单克隆抗体产生杂交瘤，已完成无血清培养基的驯化，目前正在进行高密度培养，以生产大量可用于注射的单克隆抗体。我明白了。此外，由于我们已经成功建立了允许小规模纯化抗体的方案，因此我们计划在获得大量含有抗体的培​​养上清液后立即进行大规模纯化。