Study on the relationship between depressive vulnerability and pain responsiveness due to opioid peptides in the striatum

纹状体阿片肽所致抑郁脆弱性与疼痛反应性关系的研究

基本信息

批准号：
22K06735
负责人：
宇野恭介
金额：
$ 2.5万
依托单位：
Setsunan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06735/
关键词：
うつ線条体痛み AAV

项目摘要

先行研究で得られた結果をもとにリアルタイムPCRでも再度発現変動を確認したのち、Penkのguide RNAを作成し、CRISPR/Cas9システムを用いたゲノム編集を行った。CRISPR/Cas9システムの組み込まれたアデノ随伴ウイルスベクター（AAV）の相同組み換えを行い、AAVベクターを作成した。作成したAAVベクターを一過性に細胞へ過剰発現させ、その効果を検討したところPCRやウエスタンブロッティングにおいてPenk遺伝子の発現減少が確認された。そこでこのAAVベクターを用いてAAVの作成を行った。作成したAAVを線条体に注入し、社会的敗北ストレスの暴露（repeated social defeat stress（RSDS））を行った。RSDS終了24時間後に、social interaction testにより社会性行動を測定した。さらに、閾値以下の社会敗北ストレス(micro social defeat stress(MSDS))を曝露し、社会性行動を測定した。MSDSは遺伝子改変マウスにICRマウスとの5分間の身体的接触を3回行い、それぞれの接触の後15分間隔離した。3回目の接触後は別のケージで飼育し翌日社会性行動を測定した。MSDSは通常のマウスではうつ症状を示さない軽度のストレスであるが遺伝的脆弱性があるとストレス応答を示すモデルである。その結果AAVを感染させたマウスでは、RSDSによってうつ症状を示すマウスの割合が増加した。また、MSDSにおいてコントロール群ではうつ症状を示すマウスが確認できなかったのに対し、AAVを感染させたマウスではうつ症状を示すマウスが確認された。これらのことよりPenk遺伝子がマウスうつ脆弱性に関与している可能性が示唆された。

根据之前研究中获得的结果，使用实时PCR再次确认表达变化后，我们创建了Penk的向导RNA，并使用CRISPR/Cas9系统进行了基因组编辑。 AAV 载体是通过整合 CRISPR/Cas9 系统的腺相关病毒载体 (AAV) 同源重组而创建的。当所创建的 AAV 载体在细胞中瞬时过表达并检查其效果时，通过 PCR 和蛋白质印迹证实了 Penk 基因表达的减少。因此，我们使用这个 AAV 载体创建了 AAV。将创建的 AAV 注射到纹状体中并暴露于重复的社交失败压力 (RSDS)。 RSDS 结束后 24 小时通过社交互动测试来测量社交行为。此外，受试者承受亚阈值社交挫败压力（MSDS），并测量他们的社交行为。 MSDS 让转基因小鼠与 ICR 小鼠进行了 3 次每次 5 分钟的身体接触，并在每次接触后将它们隔离 15 分钟。第三次接触后，这些动物被关在一个单独的笼子里，并在第二天测量它们的社会行为。 MSDS是一种轻度应激模型，在正常小鼠中不会表现出抑郁症状，但在基因脆弱时会表现出应激反应。结果，在感染AAV的小鼠中，由于RSDS而表现出抑郁症状的小鼠比例增加。此外，在MSDS中，没有发现对照组的小鼠表现出抑郁症状，而在AAV感染的小鼠中发现一些小鼠表现出抑郁症状。这些结果表明 Penk 基因可能与小鼠抑郁易感性有关。