多重機能集積化による高活性ナノワクチンシステムの構築とがん免疫治療への展開

多功能集成构建高活性纳米疫苗系统及其在癌症免疫治疗中的应用

基本信息

批准号：
15J12180
负责人：
能﨑優太
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Osaka Prefecture University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-04-24 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

抗原キャリアのアジュバント機能を高めるために、Toll様受容体リガンド分子であるCpG-DNAをpH応答性高分子修飾リポソームに複合化させ、その複合化法が免疫誘導機能にどのような影響を与えるかを検討した。リポソーム作製時にCpG-DNA溶液を混合するPre-mix複合体とリポソームを予め作製してからCpG-DNA溶液を混合するPost-mix複合体を作製した。前年度までに、Post-mix複合体はPre-mix複合体よりもDCの共刺激分子(CD80)の発現を誘導する能力が高く、抗腫瘍効果も高いことを明らかにした。本年度はPost-mix複合体のDCへのCpG-DNAデリバリー機能を調べるために、Post-mix複合体をDCの培養液に加えてからの経過時間を変え、共焦点レーザー顕微鏡を用いて観察した。Post-mix添加30分後からリポソームとCpG-DNAが同時に取り込まれているような画像が得られた。これはPost-mix法で複合体を調製した場合、CpG-DNAがリポソームと複合化していることを示唆する結果である。抗原キャリアにアジュバント機能を付与するもう一つの方法として、生理活性多糖を主鎖とするpH応答性高分子を用いて、抗原の細胞質送達機能とアジュバント作用を併せ持つ多機能性多糖を設計した。カードランは、DCの細胞膜表面に発現する受容体Dectin-1と相互作用してDCを活性化させることが知られている。そこで、カードランにpH応答性基を導入し、pH応答性カードラン誘導体を合成した。pH応答性カードラン誘導体修飾リポソームはDCの細胞質内に抗原をデリバリーし、マウスに皮下投与すると脾細胞から強い抗原特異的なIFN-γ産生がみられた。以上の諸成果は細胞性免疫を誘導するための抗原キャリアには細胞質内デリバリー機能とアジュバント機能を付与することが重要であることを示唆している。

为了增强抗原载体的佐剂功能，将Toll样受体配体分子CpG-DNA与pH响应性聚合物修饰脂质体缀合，缀合方式如何影响免疫诱导功能？制备预混合复合物，其中在脂质体制备期间混合CpG-DNA溶液，并且制备后混合复合物，其中在预先制备脂质体之后混合CpG-DNA溶液。前一年，研究发现Post-mix复合物比Pre-mix复合物具有更高的诱导DC中共刺激分子（CD80）表达的能力，并且还具有更高的抗肿瘤作用。今年，为了研究Post-mix复合物对DC的CpG-DNA递送功能，我们改变了将Post-mix复合物添加到DC培养液中后经过的时间，并使用共聚焦激光显微镜对其进行了观察。添加Post-mix后30分钟，获得脂质体和CpG-DNA同时掺入的图像。该结果表明，当通过后混合方法制备复合物时，CpG-DNA与脂质体复合。作为赋予抗原载体佐剂功能的另一种方法，我们使用以生物活性多糖为主链的pH响应性聚合物，设计了一种兼具细胞质抗原递送功能和佐剂功能的多功能多糖。已知 Curdlan 通过与 DC 细胞膜表面表达的受体 Dectin-1 相互作用来激活 DC。因此，将pH响应性基团引入凝胶多糖中，合成pH响应性凝胶多糖衍生物。 pH 响应性凝胶多糖衍生物修饰的脂质体将抗原递送至 DC 的细胞质中，当皮下给予小鼠时，观察到脾细胞产生强烈的抗原特异性 IFN-γ。上述结果表明，为抗原载体提供细胞质递送功能和佐剂功能对于诱导细胞介导的免疫非常重要。