無顎類ヌタウナギにおける２種ビテロジェニン遺伝子の転写調節機構の解明

阐明无颌盲鳗中两个卵黄蛋白原基因的转录调控机制

基本信息

批准号：
13J01491
负责人：
西宮攻
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

一般に卵生脊椎動物の卵は、多量の卵黄を蓄積することを特徴とする。卵黄を構成する物質は、主にビテロジェニン（Vtg）と呼ばれる雌特異血清蛋白に由来する。そして、Vtgは、雌性ホルモンであるestradiol-17β（E2）の作用により肝臓で合成される。しかし、先行研究においてヌタウナギ（Eptatretus burgeri）では、Vtg遺伝子の発現は一般的な同遺伝子発現機構とは大きく異なる可能性が示された。そこで本研究ではヌタウナギにおけるVtg遺伝子の転写調節機構の解明を目的としており、本年度は以下の実験を行った。①ヌタウナギ肝臓片培養系を用いた2種Vtg遺伝子発現誘導実験本種の雄および成熟雌から得た肝臓片をE2（1 μM）添加した培養液、雌血清または成熟雄血清を含有した培養液を用いて1日または2日間培養した。培養後に各群の肝臓片中の2種Vtg遺伝子発現量をリアルタイム定量PCR法により測定した。その結果、両Vtg 遺伝子発現量は、何れの培養条件においても顕著な変化が認められなかった。本結果に加え、以前行ったin vivo実験においてもE2によるVtg遺伝子発現誘導が顕著に起こらなかったことから、ヌタウナギにおけるVtg遺伝子の発現制御はE2やエストロジェン受容体を介した経路を主要経路とせず、他のホルモンや転写調節因子等を介する可能性が強く示された。②Vtg合成に関わる転写調節因子の網羅的解析本種におけるVtg遺伝子の発現制御に関わる他のホルモンや転写調節因子等を探索するために、雌および雄の肝臓より得たmRNAを次世代シーケンサー（HiSeq 2000; illumina社）に供したトランスクリプトーム解析を試みた。その結果、Vtg遺伝子の発現に関わる因子の特定までには至らなかった。しかし、今後さらに解析を進める上での重要なコンティグデータベースを得ることができた。

卵子脊椎动物的卵通常以累积大量的蛋黄的特征。构成蛋黄的物质主要源自称为雌激素蛋白（VTG）的女性特异性血清蛋白。然后，通过雌性激素雌二醇-17β（E2）的作用将VTG在肝脏中合成。然而，先前的研究表明，VTG基因的表达可能与兔鳗（Eptatretus burgeri）中同一基因表达的一般机理有显着差异。因此，本研究旨在阐明兔鳗鱼中VTG基因的转录调节机制，今年我们进行了以下实验。 1。使用含有E2（1μM）的培养基（1μM）和含有雌性血清或成熟雄性血清的培养基的培养基培养从雄性和该物种成熟的雌性诱导诱导两个VTG基因的实验研究1或2天。培养后，通过实时定量PCR方法测量了每组两个VTG基因的表达水平。结果，在两种培养条件下，在两个VTG基因表达水平上均未观察到显着变化。除结果外，在先前的体内实验中，通过E2诱导E2的VTG基因表达并未显着发生，并且强烈建议，兔鳗中VTG基因的表达并不能主要由E2或雌激素受体介导的途径控制，但可以通过其他激素和转录调节剂来控制。 2。对参与VTG合成的转录调节剂的全面分析，以搜索参与该物种中VTG基因表达的调节的其他激素和转录调节剂，我们尝试使用从雌性和雄性肝癌获得下一代测序的MRNA进行转录组分析（Hiseq 2000; Illumina; Illumina）。结果，未鉴定出参与VTG基因表达的因素。但是，我们能够获得一个重叠数据库，这对于将来进一步分析很重要。