細胞内動態を制御した効率的なＢ型肝炎ウイルス由来薬剤送達ナノキャリアの開発

开发具有受控细胞内动力学的高效乙型肝炎病毒衍生药物递送纳米载体

基本信息

批准号：
13J03835
负责人：
曽宮正晴
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

B型肝炎ウイルス(HBV)由来ペプチドの膜融合活性をペプチド提示リポソームの機能解析を行った結果、ペプチド中の特定のアミノ酸残基の働きによりpH感受性を示すことが明らかとなった。また、HBV由来ナノ粒子、バイオナノカプセル(BNC)の低pH依存性の膜融合活性が、脂質二重膜の組成に大きく影響されることが明らかとなった。BNCの膜融合に必要なのは、脂質二重膜中のコレステロールの存在と、脂質の脂肪酸鎖が飽和していること、の2点である事が示された。また、HBVの感染機構を、バイオナノカプセル(BNC)を使用して解析した。まずBNCに、HBVに存在している翻訳後修飾を化学的に施した。その結果、化学修飾をしたBNCでのみ、HBVの受容体であるsodium taurocholate cotransporting polypeptide (NTCP)と結合できるようになった。この修飾BNCを使用して、NTCP発現ヒト肝臓細胞株HepG2への取り込み効率を解析した。その結果、HBV受容体NTCPは細胞表面ではHBVとの結合に関与せず、細胞内部でHBV受容体として働いていることが示唆された。細胞内への取り込みは、ヘパラン硫酸プロテオグリカン(HSPG)と呼ばれる別のタンパク質が担当していることが判明した。つまり、細胞表面のHSPGと結合した化学修飾BNCは、エンドサイトーシスによって細胞内へ取り込まれた後、エンドソーム内に存在しているNTCPと結合することによってその後の感染プロセスが進行するという事が示唆された。また、作製した化学修飾BNCは、HBVの感染を抑制することが判明しており、BNCがHBV侵入阻害剤として使用できること、またBNCを使用して、更なるHBV感染機構の解明が期待できることが示唆された。作製した化学修飾BNCは、抗HBV薬を探索する際のプローブとして、共同研究先で使用されており、候補化合物のスクリーニングが行われている。これらの研究内容は、現在英文雑誌に投稿中である。

丙型肝炎病毒（HBV）肽衍生肽的膜融合活性的功能分析表明，肽在肽中特定氨基酸残基的作用证明了pH敏感性。还可以揭示出Bionanocapsules（BNCS）的低pH依赖性膜融合活性（一种HBV衍生的纳米颗粒）受脂质双层膜组成的很大影响。结果表明，BNC膜融合所需的两件事是脂质双层中胆固醇的存在，并且脂质的脂肪酸链饱和。另外，使用Bionanocapsules（BNC）分析了HBV的感染机制。首先，将BNC化学应用于HBV中存在的翻译后修饰。结果，只有化学修饰的BNC才能与HBV受体牛螺旋酸钠共转运多肽（NTCP）结合。该修改后的BNC用于分析摄取对表达NTCP的人肝细胞系HEPG2的效率。结果表明，HBV受体NTCP不参与与细胞表面上的HBV结合，而是电池内的HBV受体。发现细胞内摄取是由另一种称为硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（HSPG）的蛋白进行的。换句话说，建议通过内吞作用将与细胞表面HSPG结合的化学修饰的BNC接收到细胞中，然后与内体中存在的NTCP结合，从而导致随后的感染过程。此外，发现产生的化学修饰的BNC抑制了HBV的感染，这表明BNC可以用作HBV进入的抑制剂，并且可以预期使用BNC进一步阐明HBV感染机制。产生的化学修饰的BNC已在联合研究地点使用，作为寻找抗HBV药物的探针，并正在筛选候选化合物。这些研究主题目前已提交给英语杂志。