乳牛の子宮内膜炎における感染細菌由来エンドトキシンによる卵巣機能障害の解明

奶牛子宫内膜炎传染性细菌内毒素引起的卵巢功能障碍的阐明

基本信息

批准号：
13J05048
负责人：
真方文絵
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

H26年度は，子宮内膜炎罹患牛の感染細菌から放出される内毒素であるリポポリサッカライド(LPS)が卵母細胞の成熟過程および胚発生能に及ぼす影響を解析するために，以下の2つの実験を行った。【実験1】H25年度より継続していた卵母細胞の成熟過程に及ぼすLPSの影響についてさらに詳細に検証するために，H26年度は成熟培養に供する卵母細胞の数を増やすとともに，卵胞液中のLPS濃度と同様のレベルのLPSを添加し，より生理的な状態に近い条件での解析を行った。食肉処理場で採取したウシ卵巣から卵丘細胞－卵母細胞複合体を吸引採取し，LPSを添加した培地を用いて23時間体外成熟培養を行った。その結果、LPSはMII期に進行する卵母細胞の数を減少させた（核成熟の阻害）。また，LPSはミトコンドリアのコピー数には影響しなかったが，ミトコンドリアが細胞質全体に拡散している卵母細胞の割合を減少させ，ミトコンドリアの相対膜電位活性を低下させた（細胞質成熟の阻害）。【実験2】LPSによる核成熟および細胞質成熟の阻害作用が受精や胚発生に及ぼす影響について明らかにするために，LPS 存在下で成熟させた卵母細胞を体外受精に供し，LPSを含まない発生培地に受精卵を移して8日間培養した。その結果，LPSは受精卵の卵割率には影響を及ぼさなかったが，胚盤胞期胚への発生率を低下させた。また，LPS存在下で成熟した卵母細胞より発生した胚盤胞の栄養膜細胞の細胞数は減少した。LPSは卵母細胞の成熟機構を阻害することにより，胚発生能を低下させることが明らかになった。また，胚盤胞を構成する栄養膜細胞の細胞数が減少したことで胚の質が低下し，着床が起こりにくくなる可能性が考えられた。以上のことから，卵胞液中に存在するLPSによる卵母細胞の成熟機構阻害が，子宮内膜炎における卵巣機能障害の一因となっている可能性が考えられた。

2014年，进行了以下两个实验，以分析脂多糖（LPS）的影响，这是一种因子宫内膜炎的牛的感染细菌释放的内毒素，对卵母细胞和胚胎发育能力的成熟过程。 [实验1]为了进一步详细介绍LPS对自2003年以来一直在进行的卵母细胞成熟过程的影响，2004年，2004年使用的卵母细胞数量增加了2004年，而LPS的LPS的水平类似于与卵泡流体中LPS相似的水平，并在条件下添加了分析的卵泡浓度。从屠宰场收集的牛卵巢中吸出了积的细胞 - 素质细胞络合物，并使用补充LPS的培养基进行23小时的培养基进行体外成熟。结果，LPS减少了MII阶段（抑制核成熟）的卵母细胞数量。此外，LPS不影响线粒体拷贝数，而是降低了线粒体在整个细胞质中散布的卵母细胞的比例，并降低了线粒体的相对膜电位活性（抑制细胞质成熟）。 [实验2]为了阐明LP对核和细胞质成熟对受精和胚胎发生的抑制作用，在LPS存在下成熟的卵母细胞受到体外受精的影响，并将受精卵转移至没有LPS的发育培养基中，并培养了8天。结果，LPS对受精卵的裂解率没有影响，但降低了胚泡胚胎的发生率。此外，在LPS存在下从成熟的卵母细胞发展出的胚泡细胞中的滋养细胞数量减少。已经表明，LPS通过抑制卵母细胞的成熟机制来降低胚胎发育能力。此外，人们认为构成胚泡的滋养细胞的数量已减少，导致胚胎质量的降低，因此很难发生植入。从上面可以考虑到，卵泡液中存在的LPS对卵母细胞的成熟机理的抑制可能导致子宫内膜炎的卵巢功能障碍。