in situ象牙芽細胞ダイレクトリプログラミングへの挑戦

原位成牙本质细胞直接重编程的挑战

基本信息

批准号：
22K19611
负责人：
鈴木茂樹
金额：
$ 3.99万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-06-30 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K19611/
关键词：
IKBZ ダイレクトリプログラミング象牙質エピジェネティクス IkBz

项目摘要

野生型マウスおよびIkBz欠損マウス歯髄からの細胞回収と培養細胞系の確立を行っている。培養細胞の樹立は可能であったものの、継代すると増殖が低下する傾向にあり、実験に供する細胞数を十分に得ることができなかった。今年度は、動物実験棟の改修に伴い、予定数の飼育が不可能であったことから、次年度以降飼育動物数の予定数への増加を行い、細胞回収に使用する歯の数を増やすことで対応する予定である。さらには、細胞不死化を行うことで継続的な細胞増殖を可能にし供試細胞数の確保を行うことも検討している。IKBz欠損が歯髄細胞・象牙芽細胞のエピゲノム変化に影響を与えることを先行研究で報告してきた。一方で、歯髄幹細胞の象牙芽細胞分化過程におけるエピゲノム変化はこれまで明らかにされていない。そこで、ヒト歯髄幹細胞を石灰化誘導培地で長期培養した際の全ゲノム的なクロマチンアクセシビリティ変化をATAC-seq法で解析し、TEADsを始めとする分化に関与する転写因子群の同定とともに、CTCFなどのインシュレータータンパクが関与するゲノム上の転写領域の区切り方(TAD: Topologically Associating Domains)が分化過程において統合的に変化していることを明らかとした。CTCFはインシュレーターとしてのみならず、局所クロマチンへのHATやHDACsの局在を制御することも知られていることから、様々な種類が存在するHDACs inhibitorがin situ象牙芽細胞リプログラミングに有用である可能性を示唆している。

它一直在从野生小鼠和IKBZ缺乏的小鼠果肉中恢复细胞并建立培养细胞系统。尽管可以建立一个培养细胞，但在越过时会减少，并且实验中提供的细胞数量不够。今年，由于动物实验建筑的翻新，不可能繁殖计划的数量，因此在下一个财政年度，繁殖动物的数量将增加到计划中的繁殖动物数量，以及使用的牙齿数量对于细胞恢复，它将通过此响应。此外，还被认为通过执行不遗物并确保试验细胞的数量来实现连续细胞增殖。研究前报告说，IKBZ缺乏会影响肺部细胞和象牙芽的表观遗传学的变化。另一方面，到目前为止尚未揭示纸浆干细胞的象牙 - 布尼分化过程的表观基因组变化。因此，通过ATAC-SEQ方法分析了钙化诱导培养基中人类浆干细胞长期培养的所有遗传因素可及性的变化，并通过ATAC-SEQ方法分析了参与TEAD和其他区分以及CTCF的转录因子组，以及CTCF等。已经揭示了涉及绝缘体蛋白在分化过程中分离基因组上转录区域的方法。 CTCF不仅被称为绝缘子，而且可以控制局部染色质，因此具有各种类型的HDAC抑制剂可用于原位象牙常春藤细胞的复制。