中心体増加検知システムを介する細胞がん化抑制機構の解明

中心体增加检测系统介导的细胞癌抑制机制的阐明

基本信息

批准号：
22KJ0636
负责人：
竹田穣
金额：
$ 1.6万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ0636/
关键词：
中心体細胞分裂ストレス応答中心小体細胞骨格

项目摘要

1.注目因子ノックアウト細胞株の作製・表現型解析これまでに中心体増加を人為的に誘導したヒト由来培養細胞系でのゲノムワイドノックアウトスクリーニングにより、中心体増加に関与する重要因子の候補を複数得ていた。当該年度においては、候補因子のノックアウト細胞株の作製を昨年度から継続して行った。新たに複数因子のノックアウト細胞株の樹立に成功した。さらに、当該年度においては樹立済みの細胞株については野生型との比較による表現型解析を開始し、想定する中心体増加ストレス応答への関与を細胞生物学的に検証中である。既に複数のノックアウト細胞株でストレス応答の抑制等興味深い影響を捉えており、今後これらの因子の詳細な作用点が明らかになることが期待される。2.データベースを用いた情報学的手法による注目因子の特徴解析昨年度から行っているデータベースDepMapを用いた解析をより洗練し、多次元情報の次元削減によるマッピング比較等で注目因子間の関係性をより浮き彫りにした。昨年度実施した階層的クラスタリングによる分類と組み合わせて高精度の特徴解析が可能になっている。3.中心体増加ストレス応答解析系の開発・最適化中心体増加ストレス応答時に特異的に機能するタンパク質の活性を利用して、FRET効果によりストレス応答の有無を蛍光で検知する系を新たに開発した。現在、このセンサーの配列を改良することにより感度・特異性を最適化することを目指している。

1.感兴趣的因素：敲除细胞系的迷人和表型分析。在人为诱导的中心体增加的人为培养的细胞系中，全基因组敲除筛查已获得多个候选，这些候选者是涉及中心体增加的重要因素。在这个财政年度，自去年以来，候选因素的基因淘汰细胞系的生产一直持续。我们已经成功建立了具有多种因素的新淘汰细胞系。此外，与野生型相比，已建立的细胞系的表型分析已经始于今年，并且正在进行细胞生物学验证，因为其预定参与中心体增加了应力反应。基因敲除细胞系的数量已经捕获了有趣的效果，例如抑制压力反应，并且预计将来会揭示这些因素的详细作用点。 2。使用数据库对利息因素进行特征分析，使用DEPMAP进行分析，该分析已进行了完善，并且通过减少多维信息的维度来比较映射，从而进一步强调了利息因素之间的关系。通过使用去年进行的分层聚类将其与分类结合，可以进行高度准确的特征分析。 3。开发了用于分析中心体增加应力反应的系统的开发和优化，以利用蛋白质的活性，这些蛋白质在中心体中专门起作用，增加了应力反应，并通过FRET效应检测使用荧光的应力反应的存在或不存在。目前，该公司旨在通过改善该传感器的布置来优化灵敏度和特异性。