歯周病原細菌の分子シャペロンの機能

分子伴侣在牙周病原菌中的功能

基本信息

批准号：
09877359
负责人：
中村亮
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、菌体の超音波破砕抽出液よりATP-agaroseを用いたアフィニティークロマトグラフィー及び高速液体クロマトグラフィーを利用したゲル濾過にて、生物活性を保持した分子シャベロンを精製した。病原因子としての直接的な作用を観察するため、P.gingivalis Dnak様,A.actinomycetemcomitans GroEL様,C.rectus GroEL様の精製蛋白質(0.6μg)を96穴のディッシュにコンフルエントになるまで培養したヒト歯肉線維芽細胞と24時間インキュベーションしたところ、P.g.DnaK様蛋白質を作用させた細胞の球状化が認められた。また、A.a.GroEL様蛋白質においても5倍の濃度で球状化が確認された。これらは直接的に細胞障害を引き起こしたものと考えられる。また、特異抗体を用いて免疫沈降反応によるシャペロン分子機能の検索を行った。4℃の条件下でA.a.菌体の超音波破砕抽出液に特異抗体を加えて反応させた後、Hi-Trap ProteinG担体によりIgG抗体をトラップし、共沈降してくる蛋白質をSDS-PAGEにより観察した。非免疫抗体サンプルと比較して抗A.a.GroEL抗体サンプルでは64kDa付近及び27kDa付近に蛋白バンドが観察された。この64kDa蛋白質は抗ヒトHSP60抗体と反応したことからGroEL様蛋白質であることが推測された。しかし27kDaはこの抗体に反応せず、シャペロン機能により生成されていた蛋白質であることが予想された。現在この蛋白質の同定を行っている。

在这项研究中，使用ATP-琼脂糖和使用ATP-琼脂糖和细菌超声粉碎提取物中的高速液相色谱法纯化了一种维持生物活性的分子shiveron。为了观察直接的疾病因素，要观察dnak的直接作用，A.Actinomycetemcomitans凹槽，类似于螺旋的凹槽，直至培养96个 - 井盘，每天24小时。发现了细胞状细胞状细胞样蛋白。此外，球形化被确认为A.A. groel蛋白浓度的5倍。这些被认为直接引起细胞疾病。另外，使用独特的抗体进行免疫反应的搜索伴侣分子功能。在4°C的条件下，在A.A的超声粉提取物中添加特殊的抗体后，IgG抗体被HI-TRAP蛋白载体捕获，并且SDS-PAGE观察到SEDES的蛋白质。与非免疫抗体样品相比，在抗-a.A.A.groel抗体样品中观察到蛋白质带约为64kDa和27kDa。据推测，这种64KDA蛋白是一种类似凹槽的蛋白，因为它与抗HST HSP60抗体反应。但是，27KDA对该抗体没有反应，预计将是由伴侣功能产生的蛋白质。目前，该蛋白已鉴定出来。