筋芽細胞に対するHGFの作用-舌再建へのアプローチ-

HGF对成肌细胞的影响 - 舌头重建的方法 -

基本信息

批准号：
09877354
负责人：
大工原恭
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877354/
关键词：
筋芽細胞肝細胞増殖因子(HGF)増殖 c-Met 分化第一鰓弓舌 MyoD myogenin

项目摘要

これまでに、マウス筋芽細胞(C2C12)を組み換え体ヒトHGFの存在下で培養することで、DNA合成および細胞数の増加を確認した。またin vitroでは、HGFがオートクリン的に筋芽細胞の分化と増殖を調節していることを確認した。そこで、さらにin vivoにおいて、HGFが舌筋の分化と増殖を調節しているか否かを検討するため、以下の実験を行った。まず、胎生10日のマウス胚より、将来舌に分化する第一鰓弓を得て、HGFとその受容体であるc-Metが発現しているか否かをRT-PCR法により検討したところ、両遺伝子ともに発現していることを確認した。次にHGFとc-MetのmRNAレベルでの発現の三次元的な分布の経時的変化を検討するため、digoxygeninでラベルしたRNAプローブを作成し、ホールマウントin situハイブリダイゼーション法を胎生10日から13日のマウス胚に行ったところ、両遺伝子とも胎生10.25日ごろから発現が増し、12.5日ごろを最高に、次第に減弱するという結果が得られた。また、c-Metの発現部位と筋組織のマーカーであるデスミンの免疫染色による被染色部位は、大部分一致していた。さらに、胎生10日のマウス胚の第一鰓弓を無血清のBGJB培地で120時間培養し、in situハイブリダイゼーション法でHGFとc-MetのmRNAレベルの舌相当部での発現を検討したところ、両遺伝子ともに染色はin vivoの時よりも薄いが、c-Metの発現部位とデスミンの免疫染色による被染色部位と大部分、一致していた。以上の結果は、HGFが舌筋の分化と増殖を調節していることを示唆するものである。

到目前为止，我们已经证实，通过在重组人 HGF 存在下培养小鼠成肌细胞 (C2C12)，DNA 合成和细胞数量有所增加。此外，在体外，证实HGF以自分泌方式调节成肌细胞分化和增殖。因此，我们进行了以下实验来进一步检验HGF是否在体内调节舌肌分化和增殖。首先，我们从10天大的小鼠胚胎中获得了未来将分化为舌头的第一个鳃弓，并通过RT-PCR检查了HGF及其受体c-Met是否表达。两个基因均得到表达。接下来，为了在 mRNA 水平上检查 HGF 和 c-Met 表达的三维分布随时间的变化，我们创建了地高辛标记的 RNA 探针，并从胚胎第 10 天开始进行整体原位杂交。他们在第13天测试小鼠胚胎，发现这两个基因的表达量从胚胎第10.25天左右开始增加，在第12.5天左右达到峰值，然后逐渐下降。另外，c-Met的表达位点和肌肉组织标记物结蛋白的免疫染色的位点基本一致。此外，我们将10日龄小鼠胚胎的第一鳃弓在无血清BGJB培养基中培养120小时，并利用原位杂交检测了舌对应区域中HGF和c-Met的mRNA水平表达尽管这两个基因的染色比体内的染色淡，但c-Met表达位点与结蛋白免疫染色位点基本一致。这些结果表明 HGF 调节舌肌分化和增殖。