舌の形成・再生におけるHGFの役割―マウス舌胚の器官培養によるアプローチ―

HGF 在舌头形成和再生中的作用 - 使用小鼠舌头胚胎器官培养的方法 -

基本信息

批准号：
13877313
负责人：
大工原恭
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度は、培養筋芽細胞と舌芽器官培養系を用いて、HGFが筋分化には抑制的に働くが、筋芽細胞の増殖と遊走には促進的に働いていることを報告した。今年度は、おもにマウス胚舌筋芽細胞を用いることにより、胎生期の細胞動態のより忠実な再現を試みて下記の結果を得た。1.前年度にin situ hybridization法により、筋特異的転写因子の発現を確認している胎生12日マウス舌芽をトリプシンで消化し、舌筋芽細胞を調製した。さらに、未分化な状態を維持するのに最適な血清濃度を検討した。2.1.の細胞を1%ウマ血清培地(分化培地)で48時間培養し、RT-PCR法を行ったところ、筋特異的転写因子であるmyoDとmyogeninのmRNAの発現が確認された。3.2.の培養系にHGFを添加し、RT-PCRを行ったところ、myoDとmyogeninの発現が抑制された。一方、BrdUの取り込み量を検討したところ、HGFにより舌筋芽細胞の増殖が促進された。4.培養筋芽細胞C2C12と舌筋芽細胞の培地にHGFを添加し、total RNAを抽出して、SYBR Green real time PCR法を行ったところ、MMP-9の発現が有意に促進されたが、MMP-2の発現には影響を与えないことを確認した。5.4.の系において、培地にPI3K inhibitorを添加したところ、MMP-9の発現は抑制された。上記の結果は、胎生期の舌筋芽細胞においてHGFは筋分化にはむしろ抑制的に働くが、舌筋芽細胞の遊走と増殖には促進的に働いており、その遊走には、PI3Kを介したMMP-9の活性化が関わっている可能性を示すものである。

去年，我们利用培养的成肌细胞和舌芽器官培养系统，报道了 HGF 抑制肌肉分化，但促进成肌细胞增殖和迁移。今年，我们尝试主要使用小鼠胚胎舌成肌细胞来更忠实地再现胚胎时期的细胞动态，并获得了以下结果。 1.用胰蛋白酶消化胚胎第12天的小鼠舌芽制备舌成肌细胞，前一年通过原位杂交证实其中肌肉特异性转录因子的表达。此外，我们研究了维持未分化状态的最佳血清浓度。当来自2.1的细胞在1%马血清培养基（分化培养基）中培养48小时并进行RT-PCR时，确认了肌肉特异性转录因子myoD和肌细胞生成素的mRNA表达。当将 HGF 添加到 3.2 中描述的培养系统并进行 RT-PCR 时，myoD 和肌细胞生成素的表达受到抑制。另一方面，当检查BrdU掺入量时，HGF促进了舌成肌细胞的增殖。 4.当在培养的成肌细胞C2C12和舌成肌细胞的培养基中添加HGF时，提取总RNA，进行SYBR Green实时PCR，结果显着促进MMP-9的表达，证实了MMP的表达。 -2 不受影响。在5.4.描述的系统中，当将PI3K抑制剂添加到培养基中时，MMP-9表达被抑制。上述结果表明，在胚胎舌成肌细胞中，HGF反而抑制肌肉分化，但促进舌成肌细胞的迁移和增殖，并且迁移需要PI3K，这表明通过介导MMP-9的激活来激活MMP-9的可能性。涉及。