転写因子FOXP3スプライシングバリアントの機能とアレルギー疾患への関与

转录因子FOXP3剪接变异体的功能及其与过敏性疾病的关系

基本信息

批准号：
15K09557
负责人：
根来孝治
金额：
$ 3万
依托单位：
Teikyo Heisei University (2016-2018)Showa University (2015)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015 至 2018
项目状态：
已结题

项目摘要

申請者らは、これまでに制御性T細胞(Tregs)の主制御遺伝子であるFOXP3のsplicing variants発現量が喘息患者で対照に比べ変化していることを報告した。一方、T細胞受容体刺激によるTregsのカルシウム不応答性を利用し、Tregsの機能解析も行ってきた。喘息患者では、Tregsの機能異常を認め、そのため炎症の慢性化をきたしていることが推測されたため、FOXP3 variants発現量の変化がその機能異常と相関するかどうかを検討した。各variantsのHalo-tag constructsを作製し、細胞に最適なトランスフェクション条件を選定した。さらに、特徴的なターゲット遺伝子群の発現量をreal-time PCRにより解析し、カルシウム応答性についても検討した。抑制機能の一端を担うと考えられているcAMPの産生量を測定したところ、全長FOXP3(FL)とexson2欠損体(delta2)では、delta2の方が高産生量を示していた。Tregsの機能と相関があるカルシウム応答性に関しては、FLとdelta2との間に差異は認められなかった。Exson2が欠損していてもFOXP3の機能に問題は生じていないと考えられたが、Th17細胞の主制御遺伝子であるRORgtの発現量が亢進していた。喘息患者(成人)においてdelta2/FL比が高くなることより、TregsからTh17へのシフトがvariantsの発現量によりコントロールされているかもしれないことが示唆された。

申请人报告说，与哮喘患者的对照组相比，调节性T细胞（Tregs）的主要调节基因（Tregs）的主要调节基因的剪接变体的表达发生了变化。另一方面，我们还使用由T细胞受体刺激引起的钙征收功能分析了Treg的功能分析。据估计，在哮喘患者中观察到Tregs异常，因此炎症是慢性的，因此我们研究了FOXP3变体表达水平的变化是否与异常相关。制备了每个变体的卤标记构建体，并选择了对细胞最佳的转染条件。此外，通过实时PCR分析了特征靶基因组的表达水平，以研究钙的反应性。当测量被认为是抑制功能的一部分的CAMP的产生时，Delta2在全长FOXP3（FL）和Exson2缺陷率（Delta2）中显示出更高的产生。在钙反应性方面，FL和Delta2之间没有发现差异，这与Tregs的功能相关。尽管人们认为即使exson2不足，Foxp3的功能也没有问题，但提高了Th17细胞的主要调节基因RORGT的表达水平。哮喘患者（成人）中较高的DELTA2/FL比率表明，从Tregs到Th17的转变可能受变体的表达水平控制。