CD6の多段階的、双方向的なT細胞活性調節機構の解明と抗腫瘍免疫応答への応用

CD6对T细胞活性多级双向调控机制的阐明及其在抗肿瘤免疫反应中的应用

基本信息

批准号：
22K07124
负责人：
竹内新
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Tokyo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07124/
关键词：
T細胞活性化免疫シナプス分子イメージング

项目摘要

T細胞の活性化は、予想以上に多くの抑制分子によって厳重に管理されている。T細胞の持続的な活性化が鍵となるがん免疫治療においては、それらの抑制を効率的に排除し、T細胞の抑制＝疲弊をいかに回避できるかが大きな課題であり、各因子の制御機構の解明が重要である。本研究では、T細胞上に発現する制御因子CD6と、そのリガンドとして報告されている２種類の分子に焦点をあて、1細胞1分子イメージングによる解析を用いてT細胞活性化制御機構を時空間的な視点から明らかにし、免疫療法開発の基盤を創出することを目的とする。初年度はCD6と既知のリガンドであるCD166及びCD318との結合を確認をすると共に、リガンドを組み入れた人工脂質二重膜の作成を試みた。この人工脂質二重膜は、リガンドが存在した状況下におけるCD6の分子動態イメージングを行う際に必要となる。初めに、リガンドの結合を確認する目的でリガンドとヒト抗体のFc融合タンパク質を作成した。CD6を発現させた細胞と反応させたところ、CD6とCD166の間には明らかな結合が認められた。この結合はヒトーマウス分子間でも認められ、異種間の分子でも機能することが確認できた。一方、CD318とCD6の間には報告されている結合を認めることができなかった。これらの結果はリガンドを細胞に発現させて細胞間の接着で確認した際にも同様であったことから、本研究ではCD6とCD166との結合に焦点を絞ることにした。次にCD166を組み入れた人工脂質二重膜の作成を試みた。しかし、構造的な問題から従来の方法ではCD166が人工脂質二重膜にうまく取り込まれず、新たな手法で作成する必要が生じた。脂質の種類、タンパク質、共に条件検討を重ねた結果、CD166を組み入れた人工脂質二重膜を作成することに成功した。

T细胞激活受到比预期更多的抑制分子的紧密控制。在癌症免疫疗法中，关键是持续T细胞激活T，主要挑战是如何有效消除其抑制作用并避免T细胞抑制=衰竭，重要的是要澄清每个因素的调节机制很重要。这项研究的重点是在T细胞上表达的调节因子CD6，两种类型的分子据报道为配体，旨在利用单个单细胞单分子成像分析从时空的角度阐明T细胞激活的机制，从而为免疫疗法开发创造了基础。在第一年，我们确认了CD6与已知的配体CD166和CD318的结合，并试图创建掺入配体的人工脂质双层膜。在存在配体的情况下，需要这种人工脂质双层来对CD6的分子动力学进行成像。首先，创建了配体和人抗体的FC融合蛋白来确认配体结合。当细胞与CD6表达细胞反应时，观察到CD6和CD166之间的明显结合。在人和小鼠分子之间也观察到了这种结合，并且可以证实它在异源分子中也起作用。另一方面，未观察到CD318和CD6之间的结合。当在细胞中表达配体并通过细胞细胞粘附确认时，这些结果是相似的，因此在这项研究中，我们决定关注CD6和CD166的结合。接下来，我们试图创建一个掺入CD166的人造脂质双层。但是，由于结构性问题，使用常规方法将CD166没有正确地纳入人造脂质双层膜中，并且有必要使用新方法来创建它。在重复条件的脂质和蛋白质类型之后，我们能够创建一种掺入CD166的人造脂质双层膜。