消化器官の構築・維持におけるＷｎｔシグナル制御機構の解明

阐明Wnt信号控制机制在消化系统构建和维护中的作用

基本信息

批准号：
13J40097
负责人：
石谷閑
金额：
$ 2.76万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

タンパク質リン酸化酵素NLKは、大腸がんや肝がんにおいてWntシグナルを増強し、がん細胞の増殖生存に寄与する。このため、NLKの活性阻害化合物は、がん治療に貢献しうると期待できるが、まだそのような化合物は見つかっていない。そこで、NLKのキナーゼ活性（リン酸化酵素活性）あるいはNLKによる基質リン酸化を直接的に阻害する化合物を同定するために、 in vitroにおけるNLKによるTCF/LEFタンパク質（Wntシグナルの転写因子でNLKの基質）のリン酸化を阻害する化合物のスクリーニングを行っている。本年度は、昨年度までのin vitroスクリーニングで同定した候補化合物群について、ヒト細胞における評価を行った。その結果、細胞内でNLKの活性を特異的に阻害する化合物を6つ同定することが出来た。現在、肝がん細胞の増殖生存活性に対するNLK阻害剤の効果を評価しており、preliminaryなデータではあるが、肝がん細胞の増殖生存を阻害する効果が確認された。一方、Wntシグナルの新たな制御機構も見いだしつつある。まず、ヒトHEK293細胞やHeLa細胞をディッシュ上で低密度で培養した際にはWntシグナルが効果的に伝達されるが、高密度で培養した際にはWntシグナルの伝達が抑制されることを発見した。詳細な解析の結果、高密度培養下では、Wntシグナルの転写因子Tcf/Lefの一種が分解されており、このためシグナル伝達が低下したことがわかった。また、大腸がん細胞株では、この培養密度依存的なTcf/Lefの分化機機構が破綻しており、高密度培養でもシグナルが強く伝達された。おそらくこのシステムは組織の恒常性維持に重要な役割を果たしており、その破綻はがん発生の一因となる可能性が考えられる。

蛋白质磷酸化酶NLK增强了结肠和肝癌中的Wnt信号传导，有助于癌细胞的增殖和存活。因此，预计抑制NLK活性的化合物可以导致癌症治疗，但尚未发现这种化合物。因此，为了鉴定直接抑制NLK活性（磷酸酶活性）或NLK磷酸化的化合物，我们一直是筛选化合物，这些化合物抑制TCF/LEF蛋白磷酸化的化合物（NLK的Wnt信号和底物的转录因子（NLK的转录因子）在体外的体外。今年，我们评估了去年在人类细胞中鉴定的一组候选化合物。结果，确定了六种特异性抑制NLK活性的化合物。目前，我们正在评估NLK抑制剂对肝癌细胞增殖和存活的影响，尽管已确认初步数据可以抑制肝癌细胞的增殖和存活。同时，还发现了Wnt信号的新控制机制。首先，我们发现，当人HEK293细胞和HeLa细胞在盘子上以低密度培养时，Wnt信号会有效地传播，但是当以高密度培养时，Wnt信号传递会抑制。详细的分析表明，在高密度培养下降解了一种转录因子TCF/LEF，这是一个Wnt信号，因此信号转导降低。此外，在结肠癌细胞系中，依赖于培养密度的TCF/LEF的区分机制已崩溃，即使在高密度培养物中，信号也被强烈传播。也许该系统在维持组织稳态方面起着重要作用，并且其失败可能导致癌症暴发。