血管新生および微小管調節因子バソヒビン２を標的とした卵巣がん治療の開発

开发针对血管生成和微管调节剂血管抑制素 2 的卵巢癌治疗方法

• 批准号: 22K09551
• 负责人: 小柳 貴裕
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09551/
• 关键词: 卵巣がん; バソヒビン２; 微小管制御; 細胞周期; 血管新生; 婦人科悪性腫瘍

バソヒビン2 (VASH2)はがん細胞特異的な血管新生促進因子であり、血管新生阻害療法にむけた基礎研究が進んでいる。VASH2は微小管重合に寄与するチューブリン脱チロシン化作用（tubulin carboxypeptidase; TCP活性）も有することが近年報告された。パクリタキセル（PTX）は微小管脱重合阻害剤であり、VASH2と何らかの相互作用を示す可能性がある。卵巣がん細胞株についてVASH2ノックアウト株を樹立し、PTXに対する薬剤感受性を検討した。CRISPR/Cas9を用いたゲノム編集技術によりVASH2をノックアウトした卵巣がん細胞株（SKOV-3、SHIN-3）を樹立した。VASH2ノックアウトは2次元培養における細胞の倍加時間に影響を与えず、3次元培養の細胞集塊径にも差を認めなかった。細胞内のチューブリン脱チロシン化の状態をウエスタンブロッティング法で確認したところ、VASH2ノックアウト株では、PTX曝露による脱チロシン化チューブリン発現の亢進が抑制された。次いで、WST-1アッセイで抗がん剤に対する薬剤感受性を評価したところ、VASH2ノックアウト株ではPTX感受性がコントロールに比べて有意に増強した。一方でシスプラチンについては薬剤感受性に差を認めなかった。さらに、VASH2ノックアウト株では細胞周期のM期中期のマーカーであるCyclin B1発現が増加しており、細胞周期がM期中期で停止している細胞の割合が増加してPTXに対する薬剤感受性が増強したと考えられた。VASH2を標的とする婦人科がん治療戦略では、既知の血管新生阻害のみならずチューブリン脱チロシン化酵素活性に着目することで、抗がん剤感受性増強作用など、より多角的な視点から新たな分子標的治療の確立が期待できる。

血管霉素2（VASH2）是一种癌细胞特异性的促血管生成因子，基础研究正在进行抗血管生成治疗。最近有报道称，Vash2还具有微管蛋白羧肽酶（TCP活性），这有助于微管聚合。紫杉醇（PTX）是微管解聚抑制剂，可能与VASH2表现出一定的相互作用。为卵巢癌细胞系建立了VASH2敲除菌株，并研究了对PTX的药物敏感性。建立了使用CRISPR/CAS9敲除基因组编辑技术敲除VASH2的卵巢癌细胞系（SKOV-3，SHIN-3）。 VASH2敲除在二维培养物中不会影响细胞的两倍时间，也没有观察到三维培养物中细胞簇的大小差异。当细胞内微管蛋白驱散状态通过蛋白质印迹确认时，VASH2敲除菌株抑制了由于PTX暴露而增加的驱虫小管蛋白的表达增加。接下来，当使用WST-1分析评估药物对抗癌剂的敏感性时，与对照组相比，VASH2敲除菌株中PTX敏感性显着提高。另一方面，顺铂未观察到药物敏感性的差异。此外，VASH2基因敲除菌株显示细胞周期蛋白B1表达，细胞周期中期中期的标志物以及在细胞周期中期中期停滞的细胞的比例增加，这增加了药物对PTX的敏感性。通过针对VASH2的妇科癌症治疗策略，不仅将重点放在已知的血管生成抑制上，而且将其集中在微管蛋白发dyrosine酶的活性上，可以预计将从更加多面的角度建立新的分子靶向治疗方法，例如增强抗癌药物易感性的效果。