Development of new molecular targeted therapy for osteosarcoma lung metastasis

骨肉瘤肺转移新型分子靶向治疗的进展

基本信息

批准号：
22K09401
负责人：
中田英二
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09401/
关键词：
悪性骨・軟部腫瘍肺転移増殖 PRRX1 骨肉腫

项目摘要

骨肉腫悪性骨・軟部腫瘍は標準治療として化学療法と手術が行われる。しかし、肺転移に対する化学療法の効果は限られ、極めて予後不良である。近年、分子標的薬が登場しているが、肺転移例の予後改善は困難で、有効な新規治療薬の開発が期待されている。転写制御因子Paired related homeobox 1(PRRX1)は、四肢骨格形成に強く関与しており、その重要性に関する報告も多い。一方で、がんの悪性化への関与も報告されており、我々は骨肉腫において、PRRX1が悪性化促進因子として機能することを明らかにした。そこで、骨肉腫など、悪性骨・軟部腫瘍におけるPRRX1の役割を解明するため、腫瘍の悪性度とPRRX1の発現量の関連性を臨床的に評価し、in vitroにおける機能解析を行った。当院にて手術を行った悪性骨・軟部腫瘍の術後検体にPRRX1の免疫染色を行い、染色強度と染色陽性細胞数から高発現群と低発現群に群分けし、PRRX1の発現とその患者の５年累積生存率、再発・肺転移との関連を評価したところ、免疫染色において、高発現群は低発現群に比べ５年累積生存率が低く、転移率が高かった。in vitroでは、レンチウイルスベクターを用いてPRRX1に対するshRNA(shPRRX1)を複数の肉腫細胞株に導入した。またPiggybac systemを用いてPRRX1をドキシサイクリン依存的に過剰発現させるヒトMPNST細胞株を樹立した。対照群(空ベクター導入群)とshPRRX1導入群間、対照群(ドキシサイクリン未処理群)とPRRX1過剰発現群(ドキシサイクリン処理群)間で増殖能、遊走能、浸潤能を比較した。またshPRRX1導入群では増殖能、遊走能、浸潤能が低下し、PRRX1過剰発現群では増殖能に変化はないが、遊走能、浸潤能が増加していることが分かった。

化学疗法和手术作为骨肉瘤恶性骨和软组织肿瘤的标准治疗方法。但是，化学疗法对肺转移的有效性有限，预后非常差。近年来，分子靶向药物已经出现，但是很难改善肺转移病例的预后，并且希望开发有效的新型治疗剂。转录调节因子配对相关的同源蛋白Box 1（PRRX1）强烈参与肢体骨骼形成，并且已经报道了其重要性的许多报道。另一方面，还报道了参与癌症恶性转化的参与，我们透露PRRX1在骨肉瘤中起促恶性因子的作用。因此，为了阐明PRRX1在恶性骨和软组织肿瘤（例如骨肉瘤）中的作用，我们临床评估了肿瘤的恶性水平与PRRX1的表达水平之间的关系，并在体外进行了功能分析。在我们医院进行手术进行的恶性骨和软组织肿瘤的手术标本后，对PRRX1进行了免疫染色，并基于阳性染色细胞的染色强度和阳性染色细胞的数量，我们将其分为高表达组和低表达组。当我们评估PRRX1的表达与患者的5年累积存活率与免疫染色的复发和肺转移之间的关联时，高表达组的5年累积存活率和比低表达组的转移率更高。在体外，使用慢病毒载体将针对PRRX1（SHPRRX1）的shRNA引入多个肉瘤细胞系中。此外，使用PiggyBac系统建立了以强力霉素依赖性方式过表达PRRX1的人类MPNST细胞系。比较了对照组（空矢量组）和SHPRRX1-引进组之间的增殖，迁移和侵入性潜力，以及对照组（DoxyCycline未经治疗的组）和PRRX1超过表达组（DoxyCyCyClycline-Contercline-preateateated Group）之间进行了比较。此外，发现在SHPRRX1引入组中，增殖能力，迁移能力和侵入性能力降低了，尽管PRRX1过表达的群体中的增殖能力并未改变，但迁移能力和侵入式能力的增强能力没有改变。