ユビキチン化による蛋白質翻訳後修飾を介したAML発症・悪性化機序の解明

阐明泛素化蛋白翻译后修饰介导的 AML 发病和恶性转化机制

基本信息

批准号：
22K08492
负责人：
角南義孝
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Tokyo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

私の所属研究室は、急性骨髄性白血病(Acute Myeloid Leukemia; AML)原因遺伝子として、偽キナーゼ蛋白質をコードするTrib1を同定し、その機序としてMEK1/ERK1経路の活性化と、E3ユビキチンリガーゼCop1を介したC/EBPα分解の2つのメカニズムを報告している。そこでCop1のAML悪性化における役割を明らかにする目的で、Cop1 flox/Cre-ERT2マウスを作成し、このマウスの骨髄細胞にTrib1遺伝子をはじめとする様々なAML遺伝子を導入することで、AML細胞株を樹立した。Trib1を導入した細胞 (FT1CL)に4-OH-tamoxifen (4-OHT)を添加し、Cop1をノックアウト(KO)すると、細胞増殖が著しく抑制され、成熟好中球へ分化したが、Trib1以外のAML遺伝子を導入したAML細胞株においてはこのような表現系は観察されなかった。以上より、Cop1はTrib1依存的にAMLを悪性化していることが示唆された。C/EBPα p42アイソフォームはCop1の基質として報告されているが、FT1CL細胞において、Cop1をKOすることで、C/EBPα p42の発現が一過性に回復することを示している。さらにFT1CL細胞においてC/EBPαをノックダウンすると、Cop1 KOによる細胞増殖抑制、好中球分化が阻害され、このC/EBPαノックダウンFT1CL細胞にC/EBPα p42アイソフォームを過剰発現させることで、細胞増殖抑制阻害が部分的に解除されることを示した。C/EBPα p42はAMLにおける強力ながん抑制因子として知られており、以上の結果はTrib1/Cop1経路を介したAML悪性化において、C/EBPα p42が極めて重要な役割を担っていることを示唆している。

我的实验室已确定编码假激酶蛋白的 Trib1 是急性髓系白血病 (AML) 的致病基因，其机制涉及 MEK1/ERK1 通路的激活和 E3 泛素连接酶 Cop1 报道的两种 C/EBPα 降解机制。由 C/EBPα 介导。因此，为了阐明Cop1在AML恶性转化中的作用，我们生成了Cop1 flox/Cre-ERT2小鼠，并将包括Trib1基因在内的多种AML基因导入这些小鼠的骨髓细胞中。当将4-OH-他莫昔芬（4-OHT）添加到Trib1转染细胞（FT1CL）中敲除Cop1（KO）时，细胞增殖被显着抑制，并发生分化为成熟中性粒细胞，但Trib1以外的细胞出现这样的表型在引入 AML 基因的 AML 细胞系中未观察到。这些结果表明 Cop1 以 Trib1 依赖性方式使 AML 恶性。据报道，C/EBPα p42 亚型是 Cop1 的底物，我们发现敲除 Cop1 可暂时恢复 FT1CL 细胞中 C/EBPα p42 的表达。此外，敲低FT1CL细胞中的C/EBPα可抑制Cop1 KO诱导的细胞增殖和中性粒细胞分化，并且在这些C/EBPα敲低的FT1CL细胞中过表达C/EBPαp42亚型表明生长抑制的抑制被部分解除。 C/EBPα p42 已知是 AML 中的强肿瘤抑制因子，上述结果表明 C/EBPα p42 通过 Trib1/Cop1 途径在 AML 恶性转化中发挥极其重要的作用。