ユビキチン化による蛋白質翻訳後修飾を介したAML発症・悪性化機序の解明

阐明泛素化蛋白翻译后修饰介导的 AML 发病和恶性转化机制

基本信息

批准号：
22K08492
负责人：
角南義孝
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Tokyo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

私の所属研究室は、急性骨髄性白血病(Acute Myeloid Leukemia; AML)原因遺伝子として、偽キナーゼ蛋白質をコードするTrib1を同定し、その機序としてMEK1/ERK1経路の活性化と、E3ユビキチンリガーゼCop1を介したC/EBPα分解の2つのメカニズムを報告している。そこでCop1のAML悪性化における役割を明らかにする目的で、Cop1 flox/Cre-ERT2マウスを作成し、このマウスの骨髄細胞にTrib1遺伝子をはじめとする様々なAML遺伝子を導入することで、AML細胞株を樹立した。Trib1を導入した細胞 (FT1CL)に4-OH-tamoxifen (4-OHT)を添加し、Cop1をノックアウト(KO)すると、細胞増殖が著しく抑制され、成熟好中球へ分化したが、Trib1以外のAML遺伝子を導入したAML細胞株においてはこのような表現系は観察されなかった。以上より、Cop1はTrib1依存的にAMLを悪性化していることが示唆された。C/EBPα p42アイソフォームはCop1の基質として報告されているが、FT1CL細胞において、Cop1をKOすることで、C/EBPα p42の発現が一過性に回復することを示している。さらにFT1CL細胞においてC/EBPαをノックダウンすると、Cop1 KOによる細胞増殖抑制、好中球分化が阻害され、このC/EBPαノックダウンFT1CL細胞にC/EBPα p42アイソフォームを過剰発現させることで、細胞増殖抑制阻害が部分的に解除されることを示した。C/EBPα p42はAMLにおける強力ながん抑制因子として知られており、以上の結果はTrib1/Cop1経路を介したAML悪性化において、C/EBPα p42が極めて重要な役割を担っていることを示唆している。

我的实验室已经确定了编码假子酶蛋白的Trib1，是急性髓细胞性白血病（AML）的基因，并报告了其机制的两种机制：MEK1/ERK1途径的激活和通过E3 Ubiquitin Ligase Cop1的C/EBPα降解。因此，为了阐明COP1在AML恶性肿瘤中的作用，创建了COP1/CRE-ERT2小鼠，并将包括Trib1基因在内的各种AML基因引入了小鼠的骨髓细胞中以建立AML细胞系。当将4-OH-tamoxifen（4-OHT）添加到用Trib1（FT1CL）转染的细胞中并将COP1（KO）淘汰时，细胞增殖得到了显着抑制并分化为成熟的嗜中性粒细胞，但是在AML基因其他trib1以外的AML基因中未观察到此类表型。从以上，建议COP1以部落1的方式使AML恶化。 C/EBPαp42同工型已报告为COP1的底物，但是在FT1CL细胞中，COP1的KO导致C/EBPαp42表达的瞬时回收。此外，FT1CL细胞中C/EBPα的敲低抑制了COP1 KO的细胞增殖抑制和中性粒细胞分化，并过表达C/EBPαp42同工型在C/EBPα敲低FT1CL细胞中部分废除了细胞增殖抑制的抑制。 C/EBPαp42在AML中被称为有效的癌症抑制剂，上述结果表明C/EBPαp42在通过Trib1/COP1途径中在AML恶性肿瘤中起着至关重要的作用。