Elucidation of the involvement of RNA methylation in impairment of fear memory extinction in PTSD and development of a new therapy

阐明 RNA 甲基化与 PTSD 恐惧记忆消退受损的关系以及新疗法的开发

• 批准号: 22K07568
• 负责人: 森信 繁
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Kibi International University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07568/
• 关键词: PTSD; N6-methyladenosine; METTL; FTO; ALKBH5; 恐怖記憶の消去; RNA methylation; fear extinction

ラットの海馬から抽出したtotal RNAを対象にRNAメチル化の計測に該当する、N6-methyladenosine (m6A)の計測をEpiQuik m6A RNA Methylation Quantification Kit （EpigenteK社）を用いて行ったが、再現性に乏しく定量に適していない事がわかった。このためRNAのdenatureやNuclease Pによる断片化などRNAメチル化計測についての前処理を行ってm6Aを計測する、N6-Methyladenosine ELISA Kit (Cell Biolabs)を用いた計測法に方法を変えている。このため現時点ではまだ、具体的なSPSラット海馬のRNAメチル化の障害についてはデータが得られていない。RNAメチル化―脱メチル化反応を司る酵素である、METTL3, 14 mRNAやFTO, ALKBH5 mRNAの発現は、real-time PCR法を用いて計測を行っており、SPS処置後にラット海馬のMETTL3, 14の有意な発現増大が得られている。同じくSPS処置後のラット海馬のFTO, ALKBH5 mRNAには有意な発現の差はみられていない・SPS負荷ラットを用いた、恐怖記憶の消去障害はContextual fear conditioningとextinction trainingによって行動学的に得られおり、N6-methyladenosineの計測やRNAメチル化ー脱メチル化反応を司る酵素のための計測用サンプルは作製できている。

使用Epiquik M6A RNA RNA甲基化定量试剂盒，使用了与海马中提取的总RNA的N6-甲基腺苷（M6A）的测量。因此，该方法被更改为使用N6-甲基腺苷ELISA试剂盒（细胞Biolabs）的测量方法，该方法通过对RNA甲基化测量进行预处理来测量M6A，例如通过RNA脱发和Nuclelease碎片化。因此，尚未获得有关特定SPS大鼠海马RNA甲基化衰竭的数据。 RNA甲基化 - 使用实时PCR方法测量了Mettl3、14 mRNA，FTO和ALKBH5 mRNA的表达，这是控制薪酬反应的酶。 SPS处理后的大鼠海马FTO，ALKBH5 mRNA的表达没有显着差异，在控制N6-甲基腺苷测量和RNA甲基化 - 甲基化反应的酶的测量样品上没有显着差异。