プログルカゴン由来ペプチドを利用した新しい脂肪肝治療法開発に向けた基礎研究

使用胰高血糖素原衍生肽开发新型脂肪肝治疗方法的基础研究

基本信息

批准号：
22K07387
负责人：
小林雅樹
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07387/
关键词：
グルカゴン脂肪肝エンテログルカゴン L細胞

项目摘要

耐糖能障害の疑われる被験者に対し糖負荷試験を行った結果、プログルカゴン由来ペプチドの分泌が著しく高値を示す被験者が存在し、エイコサペンタエン酸(EPA)製剤の処方と有意な関連を示す事を見出した。EPAにより小腸L細胞の数やホルモン分泌能が増加し、特にオキシントモジュリン(OXN)の分泌の増加が肝臓の脂肪分解促進に関わっている可能性が考えられた。そのため、OXN分泌に関する解析を行うために、サンドイッチELISAによるOXNの測定系開発を行う。プログルカゴン発現細胞において蛍光タンパクを発現する遺伝子改変マウスの腸管上皮を用いて小腸オルガノイドを作成し、EPAを添加して刺激、培養を行い、L細胞の増殖やホルモン分泌能の解析を行う。L細胞の蛍光シグナルを利用し、L細胞をFACSソーティングする。単離L細胞について細胞の分化や機能に関連する遺伝子の発現解析を行い、EPAによる細胞増殖やホルモン分泌に関わる細胞内シグナル経路を探索する。小腸オルガノイドで解析したL細胞の数やホルモン分泌能の変化がマウス個体においても認められるのかについて検討するため、高脂肪食飼育を行った遺伝子改変マウスにEPAを投与し、脂肪肝や代謝に関する組織学的、生化学的解析を行う。EPAの代謝改善効果に対するプログルカゴン由来ペプチドの関与を明らかにするため、プログルカゴン遺伝子欠損マウスについても同様の解析を行う。グルカゴン受容体は主に肝臓において発現しているため、OXNの代謝改善作用、特に脂肪分解作用は肝臓のグルカゴン受容体を介して刺激されていることが予想されることから、肝特異的グルカゴン受容体欠損マウスにEPAを投与し、脂肪肝改善効果が減弱することを確認する。

对怀疑患有葡萄糖不耐症的受试者进行葡萄糖耐量测试的结果是，一些受试者表现出显着高的胰高血糖素原衍生肽分泌，这与二十碳五烯酸（EPA）制剂的处方有显着关系。 EPA增加小肠L细胞的数量和激素分泌能力，特别是胃泌酸调节素（OXN）分泌的增加可能参与促进肝脏的脂肪分解。因此，为了分析OXN的分泌，我们将开发使用夹心ELISA的OXN测量系统。将利用转基因小鼠的肠上皮来创建小肠类器官，这些小鼠在胰高血糖素原表达细胞中表达荧光蛋白，并添加 EPA 进行刺激和培养，并分析 L 细胞增殖和激素分泌能力。 L 细胞的 FACS 分选是利用 L 细胞的荧光信号进行的。我们将分析分离的L细胞中与细胞分化和功能相关的基因的表达，并探索与EPA诱导的细胞增殖和激素分泌相关的细胞内信号通路。为了研究使用小肠类器官分析的L细胞数量和激素分泌能力的变化是否也在小鼠个体中观察到，我们给喂食高脂肪饮食的转基因小鼠施用EPA，并检查脂肪肝和代谢组织。进行科学和生化分析。为了阐明胰高血糖素原衍生肽参与EPA的代谢改善作用，我们将对胰高血糖素原基因缺陷的小鼠进行类似的分析。由于胰高血糖素受体主要在肝脏中表达，因此期待通过肝脏中的胰高血糖素受体刺激OXN的代谢改善作用，特别是脂肪分解作用，并确认对身体缺陷小鼠施用EPA并改善脂肪的作用。肝脏变弱。