自己免疫疾患マウスモデルにおけるB細胞免疫寛容破綻メカニズムの解析

自身免疫性疾病小鼠模型B细胞免疫耐受破坏机制分析

基本信息

批准号：
22K07030
负责人：
田中ゆり子
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Toho University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

本研究では、生後早期よりシェーグレン症候群（SS）様病態を呈するSS疾患モデルマウスを用いて、自己反応性T細胞が正常なB細胞を自己抗体産生細胞に分化させるメカニズムを解析した。血球系細胞特異的に核内転写制御因子SATB1 (Special AT-rich sequence binding protein-1)を欠損するSATB1 cKOマウスをSS疾患モデルとして用いた。SATB1 cKOマウス頸部リンパ節T細胞を分離したのち、C57BL/6 (B6) ヌードマウスに移入した。経時的にヌードマウスにおけるSSの発症を唾液分泌量の測定により解析した。さらに、ヌードマウス頸部リンパ節、唾液腺でのB細胞活性化をフローサイトメトリー、免疫組織染色により解析した。実験に用いたヌードマウス血清を採取し、正常マウス唾液腺組織蛋白質で免疫沈降を行い、高速液体クロマトグラフ-質量分析計(LC-MS/MS)を用いて自己抗原候補分子の探索を行なった。SATB1 cKOマウス頸部リンパ節T細胞をヌードマウスに移入後、5週目には血清中に自己抗体産生が認められ、経時的に増加した。さらに、T細胞移入後３ヶ月以上経過してもヌードマウスの頸部リンパ節から胚中心B細胞が検出された。病理学的解析では、唾液腺組織内に胚中心様の濾胞形成が確認された。以上の結果よりSSモデルマウスの自己反応性T細胞は、ヌードマウスの正常B細胞を活性化し自己抗体産生細胞へと分化させることが明らかとなった。さらに、自己反応性T細胞を移入したヌードマウスでは、リンパ節のみならずリンパ節以外の組織内でも自己抗体産生B細胞が活性化常態で長期間維持されている可能性が示唆された。LC-MS/MS解析結果から、SS様病態を呈したヌードマウス血清中抗体が結合する蛋白が抽出され、現在解析を進めている。

在这项研究中，我们使用生命早期表现出干燥综合征 (SS) 样病理的 SS 疾病模型小鼠，分析了自身反应性 T 细胞将正常 B 细胞分化为自身抗体产生细胞的机制。 SATB1 cKO 小鼠以血细胞特异性方式缺乏核转录调节因子 SATB1（富含特殊 AT 的序列结合蛋白-1），被用作 SS 疾病模型。分离SATB1 cKO小鼠颈淋巴结T细胞，然后转入C57BL/6（B6）裸鼠。通过测量唾液分泌来分析裸鼠随时间的 SS 发病情况。此外，通过流式细胞术和免疫组织学染色分析了裸鼠颈部淋巴结和唾液腺中B细胞的活化情况。收集实验所用裸鼠血清，与正常小鼠唾液腺组织蛋白进行免疫沉淀，采用高效液相色谱-质谱联用仪（LC-MS/MS）寻找自身抗原候选分子。 SATB1 cKO小鼠颈部淋巴结T细胞转移至裸鼠五周后，在血清中观察到自身抗体产生，并随着时间的推移而增加。此外，即使在T细胞移植后超过3个月，在裸鼠的颈部淋巴结中仍检测到生发中心B细胞。病理分析证实唾液腺组织内形成生发中心样滤泡。上述结果表明，SS模型小鼠的自身反应性T细胞激活裸鼠的正常B细胞，使其分化为产生自身抗体的细胞。此外，在转染自身反应性T细胞的裸鼠中，表明产生自身抗体的B细胞不仅在淋巴结中而且在淋巴结以外的组织中都可以长时间维持在正常激活状态。从LC-MS/MS分析结果中，提取了一种与表现出SS样病理的裸鼠血清中的抗体结合的蛋白质，目前正在进行分析。