放射線及び重粒子線照射併用免疫治療法の開発

放射线与重离子照射相结合的免疫治疗的进展

基本信息

批准号：
17791160
负责人：
田中ゆり子
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Toho University (2006)Chiba University (2005)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791160/
关键词：
免疫学放射線癌

项目摘要

方法1.検体の確保と抹消血中免役担当細胞の測定千葉大学耳鼻咽喉科頭頸部外科、独立行政法人放射医学研究所付属病院で放射線治療又は重粒子線治療を行なっている頭頸部癌患者の末梢血を放射線照射前と放射線10Gy照射ごとに採取し単核球分画を分離回収した。単核球分画の一部を取りTCRε^+Vα24+Vβ11^+細胞又はCD1d/α・galactosylceramide (α-GalCer) tetramer^+細胞をNKT細胞として解析した。残りは、放射線治療終了後に機能解析を行なうため凍結保存した。2.NKT細胞の機能解析NKT細胞のサイトカイン産生能は、末梢血単核球分画より自己由来の樹状細胞を誘導し、α-GalCerを提示させた細胞を抗原提示細胞として末梢血単核球と共に培養後ELISPOT法により解析した。NKT細胞の増殖能は、末梢血単核球をIL-2とα-GalCer存在下で培養し、フローサイトメーターで解析した。In vitroで増殖したNKT細胞のサイトカイン産生能は、増殖したNKT細胞をPMAとIomomycinで刺激後、フローサイトメーターで解析した。また、細胞障害活性は^<51>Cr-release法で解析した。結果と考察放射線照射前後で抹消血中のNKT細胞数は減少しなかったがT細胞は減少していた。放射線治療後では患者のツベルクリン反応も低下していた事から、全身で抗原特異的な免疫抑制が起きている事が示唆された。放射線治療後のNKT細胞機能は、a-GalCerに対するIFN-g産生が低下していた。しかし照射後NKT細胞のin vitroでの増殖能は照射前と同程度であり、そのIFN-g産生能と細胞障害活性も低下していなかった事から、放射線治療を行なった患者でも抹消血NKTをin vitroで増殖、活性化して再投与する免疫治療が有効である可能性が示唆された。

方法1.在千叶大学耳鼻咽喉头颈外科和国立放射线科学研究所附属医院接受放射治疗或重离子放射治疗的头颈癌患者的外周血中采集标本并测量免疫细胞放射前采集外周血。照射后以及每次10Gy放射线照射后，分离并收集单核细胞级分。取一部分单核细胞级分，将TCRε^+Vα24+Vβ11^+细胞或CD1d/α·半乳糖神经酰胺(α-GalCer)四聚体^+细胞作为NKT细胞进行分析。放射治疗完成后，其余部分被冷冻保存以进行功能分析。 2.NKT细胞的功能分析通过从外周血单核细胞级分中诱导自体树突状细胞并使用呈递α-GalCer的细胞作为外周血单核细胞中的抗原呈递细胞来测定NKT细胞的细胞因子产生能力。球体，通过 ELISPOT 方法对它们进行分析。在IL-2和α-GalCer存在下培养外周血单个核细胞后，使用流式细胞仪分析NKT细胞的增殖能力。用PMA和伊莫霉素刺激增殖的NKT细胞后，使用流式细胞仪分析体外增殖的NKT细胞的细胞因子产生能力。另外，使用 51 Cr-释放方法分析细胞毒活性。结果与讨论放射线照射前后，外周血中NKT细胞数量没有减少，但T细胞数量减少。放射治疗后，患者的结核菌素反应也下降，表明全身发生了抗原特异性免疫抑制。关于放射治疗后的 NKT 细胞功能，响应 a-GalCer 的 IFN-g 产生减少。然而，照射后NKT细胞的体外增殖能力与照射前相同，并且其IFN-g产生能力和细胞毒活性并未降低，涉及增殖、激活和再活化的免疫治疗被认为是有效的。体外给药可能有效。