肝臓マクロファージサブセット解析から迫る新規線維化亢進NASHマウスの病態解明

通过肝巨噬细胞亚群分析阐明新型纤维化 NASH 小鼠的病理学

• 批准号: 22K07005
• 负责人: 長井 良憲
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Toyama Prefectural University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07005/
• 关键词: 非アルコール性脂肪性肝炎; マクロファージ; 腸内細菌; 線維化; 腸内細菌叢

①肝臓マクロファージサブセットの組織内局在と動態の解析：NASH誘導食又は普通食を4,8,12,24週間自由摂餌させ、肝臓のパラフィン包埋切片及び凍結切片を作製した。Ly6CとCD11cの免疫組織染色を確立し、肝臓におけるLy6C+細胞とCD11c+細胞の位置関係を解析した。その結果、CD11c+細胞は肝細胞周囲に網目状に集積し、いわゆる王冠様構造を示した。一方、Ly6C+細胞は脂肪滴を中心とした周りにドーナツ状の炎症性構造を示した。さらに蛍光染色により、NASH誘導食摂餌マウスの肝臓において、CD11c+細胞はコラーゲン線維と共局在することを見出した。②肝臓マクロファージサブセットにおける炎症・線維化関連遺伝子の発現解析：Ly6C+細胞とCD11c+細胞を単離後、炎症・抗炎症又は線維化関連遺伝子をqPCR法で測定することを目的とした。しかし、qPCRに供するには両サブセットの細胞数は非常に少なく、qPCRは実施せず、③の網羅的解析で検討することとした。その結果、CD11c+細胞には多数のケモカイン受容体が高発現することを明らかにした。③肝臓マクロファージサブセットの網羅的遺伝子解析：Ly6C+細胞とCD11c+細胞をセルソーターにより単離し、次世代シークエンス解析に供し、両サブセットに特徴的な遺伝子群を探索した。その結果、CD11c+細胞には線維化や肝星細胞の活性化に関わる遺伝子が高発現していた。一方、Ly6C+細胞には抗炎症性又は組織修復関連の遺伝子が高発現することが分かった。④3-F miceの腸内細菌叢及び腸管粘膜バリアの解析：抗生剤投与により腸内細菌叢を攪乱し、3-F miceのNASH病態や肝臓マクロファージサブセットの動態に与える影響を解析した。その結果、バンコマイシン投与によりNASH病態の悪化とCD11c+細胞の肝臓への顕著な浸潤を認めた。

1）分析肝巨噬细胞子集的组织定位和动力学：进行4、8、12和24周的NASH诱导或常规饮食的自由喂养，以制备肝脏的石蜡填充和冷冻的肝脏。建立了LY6C和CD11C的免疫组织学，并分析了肝脏中LY6C+和CD11C+细胞之间的位置关系。结果，CD11C+细胞在肝细胞周围以网状方式积累，显示出所谓的冠状结构。另一方面，LY6C+细胞在脂质液滴周围表现出甜甜圈样的炎症结构。此外，荧光染色表明，CD11C+细胞与NASH诱导的饮食喂养小鼠肝脏中的胶原蛋白纤维共定位。 2。分析肝巨噬细胞中炎症纤维化相关基因表达的分析：目的是在分离Ly6c+细胞和CD11C+细胞后通过qPCR测量QPCR炎症 - 抗炎或纤维化相关的基因。但是，为了接受qPCR，两个子集中的细胞数量很少，因此未进行qPCR，并使用详细的分析进行了研究。结果，揭示了许多在CD11C+细胞中高度表达的趋化因子受体。 ③肝巨噬细胞亚群的综合遗传分析：通过细胞分类器分离LY6C+细胞和CD11C+细胞，并进行下一代测序分析，以探索这两个亚群的特征。结果，CD11C+细胞在参与纤维化和肝星状细胞激活的基因中高度表达。另一方面，发现在LY6C+细胞中高表达抗炎或组织修复相关的基因。 ④分析了3-F小鼠的肠道菌群和肠粘膜屏障的分析：抗生素破坏了肠道菌群，以及3-F小鼠对NASH病理和肝巨噬细胞动力学的影响。结果，万古霉素的给药表明，纳什病理病毒恶化，CD11C+细胞大量浸润到肝脏中。

项目成果

新規NASHモデルマウス“3-Fマウス”の炎症・線維性変化に与える抗生剤投与の影響

抗生素给药对新型NASH模型小鼠“3-F小鼠”炎症和纤维化变化的影响

• 发表时间: 2022
• 作者: 葛西海智;多田有希;五十嵐直哉;渡辺志朗;市村-清水真祐子;常山幸一;古澤之裕;長井良憲
• 通讯作者: 長井良憲

Analysis of liver macrophage subsets in a novel dietary mouse model of non-alcoholic steatohepatitis, “3-F mice”.

新型非酒精性脂肪性肝炎饮食小鼠模型“3-F 小鼠”中肝脏巨噬细胞亚群的分析。

• 发表时间: 2022
• 作者: Tada Y;Kasai K;Makiuchi N;Tsuneyama K;Nagai Y
• 通讯作者: Nagai Y

Isoliquiritigenin Attenuates Adipose Tissue Inflammation and Metabolic Syndrome by Modifying Gut Bacteria Composition in Mice

• DOI: 10.1002/mnfr.202101119
• 发表时间: 2022-03-28
• 期刊: MOLECULAR NUTRITION & FOOD RESEARCH
• 影响因子: 5.2
• 作者: Ishibashi, Riko;Furusawa, Yukihiro;Nagai, Yoshinori
• 通讯作者: Nagai, Yoshinori

非アルコール性脂肪性肝炎の新規モデルマウス“3-Fマウス”における腸内細菌叢及び胆汁酸組成の解析

新型非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型“3-F小鼠”的肠道菌群和胆汁酸组成分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 葛西海智;古澤之裕;多田有希;五十嵐直哉;渡辺志朗;藤坂志帆;戸邉一之;市村-清水真祐子;常山幸一;長井良憲
• 通讯作者: 長井良憲

Impact of changes of the gut microbiota on the development of liver inflammation and fibrosis in a novel dietary mouse model of non-alcoholic steatohepatitis, “3-F mice”.

肠道微生物群的变化对新型非酒精性脂肪性肝炎饮食小鼠模型“3-F 小鼠”肝脏炎症和纤维化发展的影响。

• 发表时间: 2022
• 作者: Kasai K;Furusawa Y;Tada Y;Igarashi N;Tsuneyama K;Nagai Y
• 通讯作者: Nagai Y