Antioxidant activity of nitrite and its physiological significance.

亚硝酸盐的抗氧化活性及其生理意义。

基本信息

批准号：
22K06645
负责人：
土屋浩一郎
金额：
$ 2.5万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06645/
关键词：
亜硝酸塩活性酸素酸化ストレス亜硝酸活性酸素種

项目摘要

これまで予備実験として、亜硝酸塩を生体内で生成する酸化力の高い物質であるヒドロキシラジカルと接触させると、ヒドロキシラジカルを濃度依存的に消去することを見いだしていた。そこで、2022年度は、培養細胞を用い、この反応によるヒドロキシルラジカルからの亜硝酸塩による死亡保護作用をより詳細に検討することとした。マウスマクロファージ由来RAW264.7細胞を用い、培地を過酸化水素を加えたPBSに交換し、さらに365nmの紫外線を照射することでヒドロキシルラジカルを発生させた条件下で細胞生存率をMTTアッセイで検討したところ、亜硝酸塩による細胞保護作用が見られなかった。しかし実験に用いたPBSをキレート剤を用いて遷移金属を十分に除去した上で同様の検討を行ったところ、300μM過酸化水素単独では細胞障害は起きず、UV照射により障害が惹起され、これは亜硝酸塩の共存でコントロールレベルまで回復することを確認した。この結果より、これまでの実験で結果が一定しなかったのは、培養細胞実験に用いた培地に含まれる遷移金属が、過酸化水素由来の活性酸素種生成に影響を与えていたことが示唆された。実験系が確立したことで、次の検討項目として、ヒドロキシルラジカルにより、RAW264.7細胞で起きている細胞傷害について、細胞老化のマーカーであるp-γ-H2AXとp21の発現について検討したところ、ともに時間依存的な発現の増加が見いだされた。現在、これら老化マーカーに対する亜硝酸塩の効果を検討している。

此前，研究人员在初步实验中发现，当亚硝酸盐与生物体中产生的高氧化性物质羟基自由基接触时，羟基自由基会以浓度依赖的方式被消除。因此，在2022年，我们决定利用培养细胞来更详细地研究亚硝酸盐对于该反应引起的羟基自由基死亡的保护作用。使用小鼠巨噬细胞来源的RAW264.7细胞，在用含有过氧化氢的PBS替换培养基并用365nm紫外线照射产生羟基自由基的条件下通过MTT测定检查细胞活力，但亚硝酸盐没有细胞保护作用。被观察到。然而，当我们使用螯合剂从实验中使用的PBS充分去除过渡金属后进行类似的研究时，我们发现单独的300μM过氧化氢不会造成细胞损伤，但这种损伤是由紫外线照射引起的。证实共存的亚硝酸盐恢复到控制水平。这些结果表明，先前实验结果不一致的原因是培养细胞实验中使用的培养基中含有的过渡金属影响了源自过氧化氢的活性氧的产生。实验体系建立后，接下来要考虑的是细胞衰老标志物p-γ-H2AX和p21的表达，关于RAW264.7细胞中羟自由基引起的细胞损伤呈时间依赖性增加。在两种情况下都发现了表达。我们目前正在研究亚硝酸盐对这些老化标记物的影响。