Antioxidant activity of nitrite and its physiological significance.

亚硝酸盐的抗氧化活性及其生理意义。

基本信息

批准号：
22K06645
负责人：
土屋浩一郎
金额：
$ 2.5万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06645/
关键词：
亜硝酸塩活性酸素酸化ストレス亜硝酸活性酸素種

项目摘要

これまで予備実験として、亜硝酸塩を生体内で生成する酸化力の高い物質であるヒドロキシラジカルと接触させると、ヒドロキシラジカルを濃度依存的に消去することを見いだしていた。そこで、2022年度は、培養細胞を用い、この反応によるヒドロキシルラジカルからの亜硝酸塩による死亡保護作用をより詳細に検討することとした。マウスマクロファージ由来RAW264.7細胞を用い、培地を過酸化水素を加えたPBSに交換し、さらに365nmの紫外線を照射することでヒドロキシルラジカルを発生させた条件下で細胞生存率をMTTアッセイで検討したところ、亜硝酸塩による細胞保護作用が見られなかった。しかし実験に用いたPBSをキレート剤を用いて遷移金属を十分に除去した上で同様の検討を行ったところ、300μM過酸化水素単独では細胞障害は起きず、UV照射により障害が惹起され、これは亜硝酸塩の共存でコントロールレベルまで回復することを確認した。この結果より、これまでの実験で結果が一定しなかったのは、培養細胞実験に用いた培地に含まれる遷移金属が、過酸化水素由来の活性酸素種生成に影響を与えていたことが示唆された。実験系が確立したことで、次の検討項目として、ヒドロキシルラジカルにより、RAW264.7細胞で起きている細胞傷害について、細胞老化のマーカーであるp-γ-H2AXとp21の発現について検討したところ、ともに時間依存的な発現の増加が見いだされた。現在、これら老化マーカーに対する亜硝酸塩の効果を検討している。

以前，已经发现初步实验是，当亚硝酸盐与羟基自由基接触时，羟基自由基是一种在体内产生的高氧化能力的物质时，以浓度依赖性的方式消除了羟基自由基。因此，在2022年，我们决定使用培养的细胞更详细地检查亚硝酸盐对这种反应引起的羟基自由基的死亡率保护作用。使用源自小鼠巨噬细胞的RAW264.7细胞，在MTT分析中检查了细胞活力，在这种条件下，通过用过氧化氢替换PBS来产生羟基自由基，并用365 nm Ultraviolet Rays辐照培养基，并未经过细胞的活力。但是，当过渡金属从实验中使用螯合剂中使用的PB彻底去除时，我们进行了类似的研究，发现单独的300μm过氧化氢不会造成细胞损伤，紫外线辐射会造成损害，从而使疾病恢复到硝酸盐共存水平。这些结果表明，在先前的实验中，结果不一致，这表明在培养的细胞实验中使用的培养基中包含的过渡金属对源自过氧化氢的活性氧的产生有影响。随着实验系统的建立，检查了下一个项目，当P-γ-H2AX和P21的表达（细胞衰老的标志物）在RAW264.7细胞中发生的细胞损伤中检查了细胞衰老的标志物，并且发现两者的表达都与时间相关。目前，我们正在研究亚硝酸盐对这些衰老标记物的影响。