OGR1オルソログを利用した微量金属特異性を感知するOGR1のアミノ酸配列の決定

使用 OGR1 直向同源物确定感知痕量金属特异性的 OGR1 氨基酸序列

基本信息

批准号：
22K06049
负责人：
戸村秀明
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Meiji University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06049/
关键词：
OGR1 微量金属

项目摘要

OGR1は細胞外pHの低下によって活性化するプロトン感知性GPCRである。これまでのOGR1の研究は、がん組織などpHが低下している組織で精力的になされてきた。一方、ヒト、マウスのOGR1が、プロトンに加えて微量金属によっても活性化される金属感知性GPCRであることが2015年に見いだされた。本研究では「OGR1が、いままで不明であった微量金属の感知、制御を司る分子であるのか、またそうであるのならOGR1は生理的、病態生理的にどのような機能を担っているのか」を実験及び解析により解明するため、まず「OGR1オルソログ間のキメラ受容体を利用して、金属の特異性を決定するOGR1のアミノ酸配列」を特定することを目的としている。本年度は、ヒトOGR1とラットOGR1間でのOGR1応答の比較解析を行った。OGR1の活性化は、HEK細胞に各OGR1を発現させ、OGR1の活性化の程度をレポーターアッセイの測定系を用いて測定した。そして各OGR1の活性化応答のEC50値を測定し、応答性の違いを定量化した。その結果、ラットOGR1はヒトOGR1と比べて、微量金属刺激による応答が右にシフトしていた。そこでこのシフトにラットOGR1のどの領域が関与しているのかを次に調べた。ヒトとラットOGR1間でキメラ受容体を作成した。そしてこのキメラ受容体の微量金属刺激による活性化を測定した結果、ラットの細胞外領域をもつキメラ受容体で活性化応答の減弱が観察された。この結果は、種特異的な活性化を司るアミノ酸配列がOGR1の細胞外領域に存在する可能性を示唆している。

OGR1 是一种质子感应 GPCR，可通过细胞外 pH 值降低而激活。迄今为止，OGR1的研究主要在低pH组织中进行，例如癌组织。另一方面，2015年，人们发现人类和小鼠的OGR1是一种金属敏感的GPCR，除了质子之外，微量金属也会激活它。在本研究中，我们研究了OGR1是否是一种以前未知的控制微量金属传感和控制的分子，如果是的话，OGR1发挥什么生理和病理生理功能？为了通过实验和分析阐明这一点，我们首先旨在利用 OGR1 直向同源物之间的嵌合受体，鉴定了 OGR1 的氨基酸序列，该序列决定金属特异性。今年，我们对人类 OGR1 和大鼠 OGR1 之间的 OGR1 反应进行了比较分析。通过在 HEK 细胞中表达每个 OGR1，并使用报告测定测量系统测量 OGR1 激活程度来确定 OGR1 激活。然后，测量每个 OGR1 激活反应的 EC50 值，以量化反应性的差异。结果，与人类 OGR1 相比，大鼠 OGR1 对微量金属刺激的反应向右移动。因此，我们接下来研究了大鼠 OGR1 的哪个区域参与了这种转变。我们创建了人类和大鼠 OGR1 之间的嵌合受体。通过痕量金属刺激测量该嵌合受体的活化，结果观察到在大鼠中具有细胞外区域的嵌合受体的活化反应减弱。这一结果表明负责物种特异性激活的氨基酸序列可能存在于OGR1的胞外区。

项目成果

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专著数量（0）

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会议论文数量（0）

专利数量（0）

明治大学農学部生命科学科

明治大学农学院生命科学系

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) enhances cAMP production in human TDAG8-expressing cells

乙二胺四乙酸 (EDTA) 增强人 TDAG8 表达细胞中 cAMP 的产生

DOI：
10.1016/j.bbrc.2022.07.110
发表时间：
2022
期刊：
Biochemical and Biophysical Research Communications
影响因子：
3.1
作者：
Deai Masahito;Oya Rin;Saso Naosi;Tanaka Asahi;Uchida Izumi;Miyake Yuta;Tachihara Ryo;Otsugu Miku;Mine Ayumi;Sato Koichi;Tomura Hideaki
通讯作者：
Tomura Hideaki

Mn2+応答におけるラット OGR1の N末アミノ酸配列の役割

大鼠 OGR1 N 端氨基酸序列在 Mn2+ 反应中的作用