乳成分による制御性T細胞を介したがん免疫逃避機構の制御

牛奶成分通过调节性 T 细胞控制癌症免疫逃逸机制

• 批准号: 22K05522
• 负责人: 山田 潔
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Utsunomiya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K05522/
• 关键词: 制御性T細胞; がん; 脂肪酸; 乳脂肪球皮膜; 抗腫瘍免疫

CD36を高発現したTregに及ぼすMFGMの効果を明らかにするため、培養により分化させた制御性T細胞（Treg）にメラノーマ細胞の培養上清を添加し、CD36発現が上昇するかどうか検討した。また、CD36を介した脂肪酸取込みがMFGMにより抑制されるかどうかを明らかにするため、蛍光（BODIPY）標識脂肪酸の細胞内への取り込みの評価方法を検討した。腫瘍モデル細胞として汎用されているメラノーマ細胞株B16を培養し、培養上清（CM）を回収した。Tregは、C57BL/6マウスの脾臓細胞から磁気ビーズ結合抗体を利用したMACS処理により精製したCD4 T細胞を、TGF-β存在下、CD3抗体/CD28抗体で5日間刺激培養することで得た。CMで48時間培養することによるTregにおけるCD36の発現上昇をフローサイトメトリーで解析した。コントロール培地で培養したTregと比べて、メラノーマ細胞のCMで培養したTregのMFI（平均蛍光強度）が上昇していることが認められた。この結果から、がん細胞培養上清でTregを培養することで、Tregの1細胞あたりのCD36発現が増加したことが確認できた。CD36を高発現するマクロファージ細胞株RAW264.7をBODIPY標識脂肪酸を含む培地あるいはPBSで処理後、蛍光顕微鏡あるいはフローサイトメトリーで解析した。その結果、培地よりもPBSでの処理のほうがBODIPY標識脂肪酸の取り込みが促進されることが蛍光顕微鏡あるいはフローサイトメトリーで確認された。また、消化酵素処理したMFGMを添加することにより、マクロファージへのBODIPY標識脂肪酸の取り込みが抑制されたが、消化酵素と処理時間および使用するMFGMの調製方法によって脂肪酸取り込み抑制効果に差が生じることが示唆された。

为了阐明MFGM对高表达CD36的Treg细胞的影响，我们将黑色素瘤细胞的培养上清液添加到培养分化的调节性T细胞（Treg）中，并检查CD36表达是否会增加。此外，为了澄清 MFGM 是否抑制 CD36 介导的脂肪酸摄取，我们研究了一种评估细胞摄取荧光 (BODIPY) 标记脂肪酸的方法。培养广泛用作肿瘤模型细胞的黑色素瘤细胞系B16，并收集培养物上清液(CM)。通过使用磁珠结合抗体的MACS处理培养从C57BL/6小鼠的脾细胞纯化的CD4 T细胞，并在TGF-β存在下用CD3抗体/CD28抗体刺激它们5天，获得Treg。通过流式细胞术分析 CM 培养 48 小时后 Treg 中 CD36 表达的增加。观察到，与在对照培养基中培养的Tregs相比，在黑色素瘤细胞CM中培养的Tregs的MFI（平均荧光强度）增加。这些结果证实，在癌细胞培养物上清液中培养 Treg 会增加每个 Treg 细胞的 CD36 表达。将高表达CD36的巨噬细胞系RAW264.7用含有BODIPY标记的脂肪酸或PBS的培养基处理，然后使用荧光显微镜或流式细胞术进行分析。结果，通过荧光显微镜或流式细胞术证实，用PBS处理比用培养基处理更促进BODIPY标记的脂肪酸的摄取。此外，通过添加消化酶处理的MFGM，巨噬细胞对BODIPY标记的脂肪酸的摄取受到抑制，但抑制脂肪酸摄取的效果可能因消化酶、处理时间和所使用的MFGM制备方法而异。