Optimization for Zika virus oral mucosal vaccine using recombinant saccharomyces and lactobacilli

使用重组酵母菌和乳酸杆菌优化寨卡病毒口腔粘膜疫苗

• 批准号: 22K10495
• 负责人: 正木 秀幸
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kindai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2026-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K10495/
• 关键词: ジカウイルス; 粘膜ワクチン; コレラトキシンB; 乳酸菌; 酵母菌

フラビウイルス属のヒト感染性ウイルスであるジカウイルス(ZIKV)は、性感染症の側面や催奇形性など他のフラビウイルス属とは異なる特性を持ち、流行地域に小頭症児の出生が多発するもワクチンは未開発である。コールドチェーン不要など発展途上国でのワクチン接種に有利、かつ生殖器などの粘膜に強い免疫を誘導する粘膜ワクチンの特質に着目して、経口粘膜ワクチン抗原として用いる目的で強力かつ安全性の高い粘膜アジュバントであるコレラトキシンB(CTB)と防御誘導性蛋白質であるZIKVのエンベロープ（E）蛋白質を菌体表面に共発現する乳酸菌及び酵母菌を樹立し実験動物に投与して、より有効な防御粘膜免疫が得られるか検討する。以上の目的のため、（１）CTB発現系の作成、（２）ZIKVE蛋白質菌体表面発現乳酸菌株の樹立、および（３）先に樹立したZIKVE蛋白質菌体表面発現酵母菌株の発現至適条件の検討を行った。（１）については、CTB人工遺伝子を大腸菌用発現ベクターpGEX-6P-2にIn-fusion法を用いて組み込み、グルタチオンSトランスフェラーゼ(GST)－CTB融合蛋白として発現させるコンストラクトを作成し大腸菌を形質転換後、IPTG添加培養によりGST－CTB融合蛋白質が発現誘導されることを確認した。（２）については、ZIKVE蛋白質遺伝子をIn-fusion法を用いて乳酸菌菌体表面発現ベクターpSGANC332に組込んで発現コンストラクトpSGANC332_ZIKVEを構築、電気穿孔法により乳酸菌にtransfectして、菌体表面ZIKVE蛋白質発現乳酸菌株を樹立した。同菌株を加熱処理により死菌化した後にマウスに経口免疫したところ、血清中にZIKVE特異的IgGが誘導されることを確認した。（３）については、ガラクトース添加によるZIKVE蛋白質発現誘導についての最適条件の検討を行った。

Zika病毒（ZIKV）是Flavivirus属的人类感染性病毒，其特征与其他黄病毒属的特征不同，例如性传播疾病的方面和致病性，尽管在地方性地区，小头畸形儿童的出生数量很高，但未开发疫苗。 Focusing on the characteristics of mucosal vaccines that are advantageous for vaccination in developing countries, such as the need for cold chains, and that induces strong immunity to mucosa in the genitals, we will investigate whether lactic acid bacteria and yeast bacteria co-express the envelope (E) protein of cholera toxin B (CTB), a powerful and highly safe mucosal adjuvant, and ZIKV, a防御诱导的蛋白在细菌的表面共表达并给予实验性动物，以查看是否可以实现更有效的保护性粘膜免疫。为了实现上述目的，（1）创建一个CTB表达系统，（2）在Zikve蛋白细胞表面建立乳酸细菌菌株，以及（3）研究了在Zikve蛋白细胞表面上先前建立的酵母菌株的最佳表达条件。关于（1），证实CTB人造基因使用融合方法纳入了大肠杆菌表达载体PGEX-6P-2中，并且该构建体以谷胱甘肽S-转移酶（GST）-CTB融合蛋白的形式表示，并通过转化coli后，通过groped fusion Fusion protein进行了概述。对于（2），将Zikve蛋白基因掺入乳酸细菌细胞表面表达载体PSGANC332中，使用融合方法构造表达构建构建构建psganc332_zikve，乳酸细菌被静脉染料转染，通过电穿孔转染乳酸细菌，以建立乳酸细菌菌株表达Zikve蛋白在细胞表面上。当菌株通过热处理杀死，然后口服免疫时，可以证实在血清中诱导Zikve特异性IgG。关于（3），研究了通过添加半乳糖来诱导Zikve蛋白表达的最佳条件。