崩壊した口腔常在微生物叢を占有する外来性定着種の網羅的特定と予後への影響の解明

全面鉴定占据被破坏的口腔常驻微生物群的外来定殖物种并阐明其对预后的影响

基本信息

批准号：
21K19606
负责人：
竹下徹
金额：
$ 4.08万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-07-09 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K19606/
关键词：
口腔常在微生物叢舌苔 16S rRNA

项目摘要

本年度は前年度から継続して九州大学病院における造血細胞移植患者の被験者登録を進めた。造血細胞移植患者12名を対象者として登録し、入院後移植前の歯科受診を行った際に研究参加への同意を取得し舌中央部から舌苔検体を採取した。同じ患者から移植当日と移植3週後に同様の方法で舌苔検体を採取し微生物叢構成の変化を追跡した。舌苔の細菌構成解析は検体から微生物群集DNAを抽出したのちPCR法を用いて細菌16S rRNA遺伝子V1-V2領域を網羅的に増幅し、次世代シーケンサーIon GeneStudio S5を用いて塩基配列を決定した。各移植患者の臨床情報を取得し細菌構成の変化と臨床情報との関連について検討した。また移植日数日以内に対象者の肛門スワブ検体を取得し、舌苔検体と同様に16S rRNA遺伝子を利用する細菌構成解析法を用いて細菌構成を決定した。舌苔細菌構成と肛門スワブ検体の細菌構成を比較することで飲み込まれた口腔微生物の腸管への移行について検討した。加えて移植当日には舌苔微生物叢解析用の検体とともに舌苔スワブ検体を採取し血液寒天培地、ブドウ球菌選択培地、薬剤耐性菌選択培地に塗布し菌体の取得を試みた。この方法で対象者の舌苔からブドウ球菌数株が分離された。加えて過去の調査にて舌苔を採取した在宅ないし施設入所高齢者の細菌構成解析結果を再解析し、造血細胞移植患者同様に通常口腔ではみられない細菌種の有無を探索した。加えてrrna遺伝子ITS領域を用いた網羅的真菌叢解析法を用いて異常真菌の検出について検討を行った。

今年，继去年的基础上，我们继续在九州大学医院登记造血细胞移植患者。 12名造血细胞移植患者作为受试者，同意在住院后和移植前的牙科就诊期间参与研究，并从舌中心采集舌苔样本。使用相同的方法在移植当天和移植后3周从同一患者身上采集舌苔样本，并追踪微生物组组成的变化。为了分析舌苔的细菌组成，从标本中提取微生物群落DNA，利用PCR全面扩增细菌16S rRNA基因V1-V2区域，并利用新一代测序仪Ion GeneStudio S5测定核苷酸序列。我们获得了每位移植患者的临床信息，并检查了细菌组成的变化与临床信息之间的关系。此外，在移植后几天内从受试者身上获取肛门拭子标本，并使用与舌苔标本相同的细菌成分分析方法（使用16S rRNA基因）测定细菌成分。我们通过比较舌苔和肛门拭子标本的细菌组成，研究了吞咽的口腔微生物向肠道的转移。此外，在移植当天，将舌苔拭子标本与舌苔微生物组分析标本一起收集，并涂在血琼脂、葡萄球菌选择培养基和耐药菌选择培养基上，试图获得细菌细胞。使用这种方法，从受试者的舌苔中分离出几种葡萄球菌菌株。此外，我们重新分析了居住在家里或在过去调查中收集舌苔的设施中的老年患者的细菌成分分析结果，并寻找口腔中通常不存在的细菌种类的存在，类似于患者接受造血细胞移植。此外，我们还利用rrna基因ITS区域的综合真菌菌群分析方法研究了异常真菌的检测。