Identification of host factors that regulate Alu retrotransposition

调节 Alu 逆转录转座的宿主因子的鉴定

基本信息

批准号：
21K19219
负责人：
三好知一郎
金额：
$ 4.08万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-07-09 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K19219/
关键词：
Alu レトロトランスポゾン転移 LINE-1 ゲノム SINE

项目摘要

現在、Aluの転移をモニターするレポーターコンストラクトは、G418耐性遺伝子ただ1種類しか存在しない。このためコロニー形成能の低い細胞株や既に遺伝子改変によりG418耐性となっている細胞株についてはAluの転移を観察することができない。そこでAluの転移アッセイをより多くの細胞株に適用し、かつその制御因子を広範に探索するための遺伝学スクリーニングへと発展させるために、これを蛍光蛋白質によって可視化する手法の開発に取り組んだ。初年度は、転移を可視化するための候補コンストラクトを複数作成した。本年度は、これらを改変して多くの細胞株に用いることができる汎用ベクターと組み合わせることで実用化を目指した。そのためにL1のORF2pとAluの転移可視化コンストラクトを共発現するベクターを新たに作成し細胞に導入したところ、これまでに報告されているG418耐性遺伝子で得られたAluの転移頻度と、蛍光蛋白質で可視化した場合で、ほぼ同等の転移頻度が観察された。またこれはL1の逆転写酵素活性を失活させると蛍光蛋白質を発現する細胞がほとんど観察されなかったことから、Aluの転移を蛍光蛋白質で可視化し、定量化することが可能であることを示唆している。しかし、今後ゲノム解析をすすめ、本当にAluがゲノム内に挿入されたのかを確認する必要がある。

当前，只有一个记者构造可以监视Alu转移。因此，由于遗传修饰，无法观察到菌落形成低的细胞库存和已经变得G418耐药的细胞库存的细胞库存。因此，为了将ALU的转移测定法应用于更多的细胞，并将控制因子开发到遗传筛查中以探索广泛的控制因子，我们开发了一种通过荧光蛋白来可视化它的方法。在第一年，我们创建了多个候选收缩来可视化转移。在这个财政年度，我们旨在通过修改它们并将它们与可用于许多细胞使用的通用 - 可使用矢量相结合，以实现实际使用。因此，在可视化的情况下，将L1和Alu的ORF2P强调并引入细胞的矢量。此外，这表明可以将其可视化和量化Alu的转移，因为当L1反向复制酶活性时，几乎观察到表达荧光蛋白的细胞。但是，有必要在将来推荐基因组分析，并确认ALU确实插入了基因组中。

项目成果

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专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

The interferon stimulated gene-encoded protein HELZ2 inhibits human LINE-1 retrotransposition and LINE-1 RNA-mediated type I interferon induction

干扰素刺激的基因编码蛋白 HELZ2 抑制人 LINE-1 逆转录转座和 LINE-1 RNA 介导的 I 型干扰素诱导

DOI：
10.1101/2022.03.26.485892
发表时间：
2022
期刊：
bioRxiv
影响因子：
0
作者：
Luqman-Fatah Ahmad;Watanabe Yuzo;Ishikawa Fuyuki;Moran John V.;Miyoshi Tomoichiro
通讯作者：
Miyoshi Tomoichiro

Molecular interplay between mitochondrial and nuclear single-stranded DNA-binding proteins facilitate human LINE-1 retrotransposition

线粒体和核单链DNA结合蛋白之间的分子相互作用促进人类LINE-1逆转座

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
Sugino K.;Makino T.;Watanabe Y.;Ishikawa F.;Moran J.V. and Miyoshi T.
通讯作者：
Moran J.V. and Miyoshi T.

Multilayered host mechanisms that control human LINE-1 retroransposition

控制人类 LINE-1 逆转录的多层宿主机制

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
Nishimori K.;Abdul Fatah A.L.;Watanabe Y.;Ishikawa F.;and Miyoshi T.;三好　知一郎;三好　知一郎;三好　知一郎
通讯作者：
三好　知一郎

The interferon-stimulated gene protein HELZ2 inhibits human LINE-1 retrotransposition

干扰素刺激的基因蛋白HELZ2抑制人LINE-1逆转录转座

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
Abdul Fatah A.L.;Watanabe Y.;Ishikawa F.;Moran J.V. and Miyoshi T.
通讯作者：
Moran J.V. and Miyoshi T.

The interferon stimulated gene product HERC5 inhibits human LINE-1 retrotransposition

干扰素刺激的基因产物HERC5抑制人LINE-1逆转座

DOI：
发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
0
作者：
Nishimori K.;Abdul Fatah A.L.;Watanabe Y.;Ishikawa F.;and Miyoshi T.
通讯作者：
and Miyoshi T.

DOI：
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作者：
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通讯作者：
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