Acceleration of unexplored periodontal disease vaccine development by intranasal administration of bacterial membrane vesicles

通过鼻内施用细菌膜囊泡加速未探索的牙周病疫苗的开发

• 批准号: 21K18284
• 负责人: 中尾 龍馬
• 金额: $ 16.64万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Pioneering)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-07-09 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K18284/
• 关键词: 細菌由来膜小胞; 細菌膜小胞; 歯周病; ワクチン; 粘膜免疫

ヒト、及びイヌに共通の歯周病原細菌と考えられている Porphyromonas gingivalis (Pg)、 Treponema denticola (Td)、Fusobacterium nucleatum (Fn) の３菌種につき、それぞれの培養上清から超遠心分離法により外膜小胞(OMVs)を回収した。上記3菌種由来OMVsに加え、ヒト若年性歯周炎に関連するAggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa)、イヌの歯周病原細菌Porphyromonas salivosa (Ps)、及びプロバイオティクス大腸菌Nissle 1917 (EcN)のOMVsを同時に投与する群も設定した。BALB/cマウスに３週間隔で3回、OMVsの経鼻投与を行い、３回目の免疫の２週間後に血清と唾液を採取した。血清と唾液中の抗体産生量は、凍結乾燥菌体を固層化したELISAにより評価した。その結果、Pg、Td、そしてEcNの３種のOMVsを混合したワクチン接種群のマウスにおいて、強力なPgおよびTdに対する液性免疫応答が誘導され、当該マウス血清IgG、及び唾液SIgAは、イヌ、ネコ、サル等の歯周病と関連する Porphyromonas gulaeにも交叉反応を示した。以上、マウスにおいてPgとTdに対する液性免疫を最も強く誘導できる３種類のOMVsワクチンの組み合わせ (Pg、Td、EcN) を決定した。この結果に基づき、８頭のビーグル犬を用いた歯周病ワクチンの実験を開始した。ビーグル動物実験は、約９ヶ月間経過を追い、本年度内に実験を終了した。現在、得られたサンプルを解析中である。

通过超速离心从各自的培养上清液中收集三种细菌，牙龈卟啉单胞菌（Pg）、齿垢密螺旋体（Td）和具核梭杆菌（Fn），这三种细菌被认为是人类和狗的常见牙周病原体。收集 OMV）。除了源自上述三种细菌的 OMV 之外，还来自与人类幼年牙周炎相关的放线菌伴放线杆菌 (Aa)、犬牙周病原体唾液卟啉单胞菌 (Ps) 和益生菌大肠杆菌 Nissle 1917 (EcN)同时收集了待施用的组。以三周为间隔对BALB/c小鼠鼻内给予OMV 3次，并在第三次免疫后两周收集血清和唾液。使用冻干细菌细胞通过 ELISA 评估血清和唾液中产生的抗体量。结果，在接种 Pg、Td 和 EcN 三种 OMV 混合物的小鼠中，诱导了针对 Pg 和 Td 的强烈体液免疫反应，并且小鼠血清 IgG 和唾液 SIgA 也观察到了交叉反应。古拉卟啉单胞菌，与猫、猴子等的牙周病有关。如上所述，我们确定了三种 OMV 疫苗（Pg、Td、EcN）的组合，可以最强烈地诱导小鼠针对 Pg 和 Td 的体液免疫。基于这些结果，我们开始使用八只比格犬进行牙周病疫苗实验。小猎犬动物实验历时约九个月，于今年内完成。目前正在对获得的样本进行分析。

项目成果

腸内細菌由来メンブレンベシクルによる宿主免疫を介した宿主微生物叢制御

使用肠道细菌来源的膜囊泡通过宿主免疫控制宿主微生物群

• 发表时间: 2021
• 作者: 奥田真由;尾花 望;奥脇響;中尾 龍馬;泉福 英信;野村 暢彦
• 通讯作者: 野村 暢彦

ウシ型結核菌弱毒株BCG由来メンブレンヴェシクルを用いた新規結核ワクチン開発

使用源自减毒牛分枝杆菌菌株 BCG 的膜囊泡开发新型结核病疫苗

• 发表时间: 2023
• 作者: 山口雄大;寒川訓明;中尾龍馬;明田幸宏
• 通讯作者: 明田幸宏

外来性莢膜多糖を発現するプロバイオティクス大腸菌が作る膜小胞ワクチンの特性評価

表达外源荚膜多糖的益生菌大肠杆菌生产的膜囊泡疫苗的表征

• 发表时间: 2021
• 作者: Ryoma Nakao;Hiroaki Kobayashi;Yusuke Iwabuchi;Yusuke Sasaki;Madeleine Ramstedt;Satoru Hirayama;Makoto Ohnishi
• 通讯作者: Makoto Ohnishi

Prospective vaccine strategy using bacterial membrane vesicles delivered into nasal cavity

使用细菌膜囊泡递送至鼻腔的前瞻性疫苗策略

• 发表时间: 2021
• 作者: 中尾龍馬;山口雄大;石原和幸;明田幸宏;Ryoma Nakao
• 通讯作者: Ryoma Nakao

プロバイオティクス大腸菌キメラ由来メンブレンヴェシクルによる莢膜保有病原体に対するワクチン

使用益生菌大肠杆菌嵌合体衍生的膜囊泡对抗荚膜病原体的疫苗

• 发表时间: 2023
• 作者: 中尾龍馬;岩渕佑介;川原一芳;明田幸宏;大西真
• 通讯作者: 大西真