Development of a novel material, lectin-silk, using various types of fish lectins.

利用各种鱼类凝集素开发新型材料凝集素丝。

基本信息

批准号：
21K18225
负责人：
杣本智軌
金额：
$ 16.64万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Pioneering)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-07-09 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

昨年度は、トラフグ由来のペントラキシン(PTX)、ネコザメ由来のC-typeレクチン(HjCL)の2種類のレクチンをレクチンシルクの導入レクチンの候補とした。本年度は新たな魚類のレクチンの候補として、マダイ由来のCq1-likeレクチン（Cq1-like）を選定した。Cq1-likeも他のレククチン分子と同様にマウスDO-11.10細胞へ遺伝子導入後、ウェスタンブロッティングで発現を確認した。次に死菌サンプルをコーティングしたプレートに抗Myc-tag精製キットで精製したCq1-likeを反応させた。対照区と比較し顕著な結合はみられなかったが、菌に対する結合がみられたため、Cq1-likeもレクチンシルクの候補とした。PTX、 HjCL、Cq1-likeの3種類の魚類レクチンとフィブロインＬ鎖を融合した組換えカイコ用のコンストラクトをそれぞれ作製した。これら3種類のコンストラクトを混合し、カイコ卵にマイクロインジェクションした。1回目、425粒にマイクロインジェクションし結果、151頭が孵化し67蛾区のG1を得た。次に213粒にインジェクションし56頭が孵化し10蛾区のG1を得た。3回目、418粒にインジェクションし、120頭が孵化し13蛾区のG1を得た。しかしながら、3回すべてにおいて、組換えカイコは得られなかった。現在、4回目のインジェクションに向けて準備を進めている。また、レクチンシルクの候補となるハタ科の体表粘液レクチンを同定した。今後、このレクチンがレクチンシルクの候補となるのか病原体への結合性を調べる予定である。

去年，衍生自猫鲨鱼的金枪鱼粉鱼和C型凝集素（HJCL）的两种类型的凝集素，源自猫鲨的C型凝集素（HJCL），用作引入凝集素丝的候选物。今年，我们选择了一种源自红海Bream（类似CQ1）的CQ1样凝集素作为新鱼凝集素的候选者。与其他卵黄素分子相似，CQ1样在转染到小鼠DO-11.10细胞后通过蛋白质印迹表达。接下来，使用抗Myc-TAG纯化试剂盒将带有死细菌样品涂覆的板与CQ1样纯化反应。尽管没有观察到与对照区的显着结合，但CQ1样也是凝集素丝的候选者，因为观察到与细菌的结合。制备了重组蚕的构建体，并融合了三种类型的鱼凝集素，PTX，HJCL和类似CQ1的链蛋白，并带有纤维蛋白L链。将这三种类型的构建体混合，并将其微注射到蚕鸡蛋中。首次对425个胶囊进行了显微注射，并孵化了151个胶囊，并从67个飞蛾区域获得了G1。接下来，注入了213个谷物，其中56个孵化，从第十蛾地区获得G1。第三次注射418颗谷物，并孵化了120个谷物，从第13蛾地区获得G1。但是，在所有三次都没有获得重组蚕。目前，正在为第四次注射做准备。我们还鉴定出来自石斑鱼家族的身体表面粘液凝集素，它们是凝集素丝的候选者。将来，我们计划研究该凝集素是否是凝集素丝的候选者，以确定其与病原体的结合特性。

项目成果

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专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Development of single chain variable fragment (scFv) conjugated affinity silk for the detection of Ichthyophthirius multifiliis

开发用于检测多子鱼霉的单链可变片段（scFv）缀合亲和丝

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
杣本智軌;Harsha Prakash;小島桂,　佐藤充.;榊原舞・白樫正・青木隆一郎・升間主計・中村修・筒井繁行;Harsha Prakash・Mitsuru sato・Katsura Kojima・Atsushi Sato・Takahiro Nagasawa・Miki Nakao・ Tomonori Somamoto
通讯作者：
Harsha Prakash・Mitsuru sato・Katsura Kojima・Atsushi Sato・Takahiro Nagasawa・Miki Nakao・ Tomonori Somamoto

Development of a filter device for the prevention of aquatic bacterial disease using a single-chain variable fragment (scFv)-conjugated affinity silk.