ヒトＴＮＲＣ６ＡとＣＮＯＴ１による核内転写制御機構の解明と細胞癌化との関連

阐明人TNRC6A和CNOT1的核转录控制机制及其与细胞癌变的关系

• 批准号: 18J13860
• 负责人: 須澤 壮崇
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-04-25 至 2020-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18J13860/
• 关键词: microRNA; GW182; リン酸化; RNAサイレンシング

TNRC6Aは、miRNAによる遺伝子抑制機構において、miRNA-AGO複合体とCCR4-NOT複合体を結ぶ足場タンパク質として機能する。近年、TNRC6Aが核-細胞質間シャトリングタンパク質であり、miRNAを核内へ輸送することが明らかとなったが、核内における機能については不明な点が多い。本研究では、TNRC6Aの核内機能の解明を試みた。・TNRC6A複合体構成因子の解析：質量分析法を用いたTNRC6A複合体構成因子の解析により、CCR4-NOT複合体の一部が核内でもTNRC6Aと相互作用することが明らかとなった。CCR4-NOT複合体は核内において、c-Myc等のプロモーター領域に結合し転写調節に働くことが報告されているが、TNRC6Aをノックダウンすることによるこれらの遺伝子発現への影響は見られなかった。そのため、核内CCR4-NOT複合体による既知の転写調節とは異なる機構により、遺伝子発現を制御する可能性が示唆された。また、KEGGを用いた解析から、核内TNRC6Aの相互作用因子としてスプライソソーム関連因子も多く検出されたことから、TNRC6Aは核内で複数の異なる遺伝子制御機構に関与する可能性が示唆された。・TNRC6Aのリン酸化による機能制御：質量分析によりTNRC6Aのリン酸化残基が検出された。AGOやCCR4-NOTとの相互作用領域におけるリン酸化残基を同定し、相互作用に与える影響を検証した。その結果、AGOとの相互作用はリン酸化により安定化し、CCR4-NOTとの相互作用は減弱する傾向が見られた。さらに、AGOとの相互作用領域のリン酸化はRNAサイレンシング活性の増強に働くことが分かった。TNRC6Aは核内および細胞質で異なるリン酸化パターンを有することから、リン酸化がTNRC6Aの細胞質と核内における相互作用形成および機能を制御する可能性が示唆された。

TNRC6A充当连接miRNA-ago复合物和CCR4复合物在miRNA抑制基因机理中的支架蛋白。近年来，据透露，TNRC6A是一种核质班车蛋白，并将miRNA运输到核中，但是关于其在细胞核中功能的未知数很多。在这项研究中，我们试图阐明TNRC6A的核功能。 - TNRC6A复合成分因素的分析：使用质谱法的TNRC6A复合成分因子的分析表明，CCR4-not复合物的一部分即使在细胞核中也与TNRC6A相互作用。据报道，CCR4不复合物与核中的启动子区域（例如C-Myc）结合，并在转录调控中起作用，但是通过击倒TNRC6A来观察到对这些基因的表达的影响。因此，已经提出，基因表达可以通过与核CCR4-无复合物不同的转录调控的机制调节。此外，使用KEGG的分析还检测到许多与拼接相关的因子作为核TNRC6A的相互作用因子，这表明TNRC6A可能参与了细胞核中多种不同的基因调节机制。 - 通过TNRC6A磷酸化的功能控制：通过质谱检测到TNRC6A的磷酸化残基。与AGO和CCR4相互作用区域中的磷酸化残基被鉴定出来，并验证了它们对相互作用的影响。结果，与AGO的相互作用是通过磷酸化稳定的，与CCR4-NOT的相互作用往往会减弱。此外，发现与AGO的相互作用区域的磷酸化作用在增强RNA沉默活性。 TNRC6A在细胞核和细胞质中具有不同的磷酸化模式，这表明磷酸化可能调节细胞质和细胞核中TNRC6A的形成和功能。

项目成果

Identification and functional analysis of phosphorylated amino acids in the C-terminal region of a human GW182 family protein, TNRC6A.

人 GW182 家族蛋白 TNRC6A C 端区域磷酸化氨基酸的鉴定和功能分析。

• 发表时间: 2018
• 作者: 宗像扶早子;須澤壮崇;西賢二;程久美子
• 通讯作者: 程久美子

Establishment of human GW182 family knock out cells using CRISPER/Cas9 system and analysis of their effects on RNA silencing.

利用CRISPER/Cas9系统建立人GW182家族敲除细胞并分析其对RNA沉默的影响。

• 发表时间: 2019
• 作者: Efe Begar;Masataka Suzawa;Kumiko Ui-Tei
• 通讯作者: Kumiko Ui-Tei

Phosphorylation of GW-II motif of a human GW182 family protein, TNRC6A, enhances AGO binding and RNA silencing activity.

人类 GW182 家族蛋白 TNRC6A 的 GW-II 基序的磷酸化可增强 AGO 结合和 RNA 沉默活性。

• 发表时间: 2019
• 作者: Masataka Suzawa;Valeriia Volodkina;Kenji Nishi and Kumiko Ui-Tei.
• 通讯作者: Kenji Nishi and Kumiko Ui-Tei.

Analysis of RNA silencing activity of human GW182 family knockout cells generated by CRISPR-Cas9.

CRISPR-Cas9 产生的人 GW182 家族敲除细胞的 RNA 沉默活性分析。

• 发表时间: 2019
• 作者: Efe Begar;Masataka Suzawa;Kumiko Ui-Tei.
• 通讯作者: Kumiko Ui-Tei.

Subcellular localization-dependent phosphorylation of human TNRC6A differently regulates AGO binding and RNA silencing activities.

人 TNRC6A 的亚细胞定位依赖性磷酸化以不同方式调节 AGO 结合和 RNA 沉默活性。

• 发表时间: 2019
• 作者: Masataka Suzawa;Valeriia Volodkina;Kenji Nishi;Hiroko Kozuka-Hata;Masaaki Oyama and Kumiko Ui-Tei.
• 通讯作者: Masaaki Oyama and Kumiko Ui-Tei.