エピジェネティクスに基づく脳の性分化メカニズムの解明

基于表观遗传学阐明大脑性别分化机制

基本信息

批准号：
09J08918
负责人：
橋本隆
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyoto Prefectural University of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

エピジェネティクスに基づく外傷後ストレス障害(PTSD)の病態解明22年度より開始した本実験ではPTSDの動物モデルであるSPSラットを使用し、脳内のストレス関連因子の発現解析を行ってきた。海馬におけるグルココルチコイド受容体の発現変化は認められなかった。ストレス反応の要となるHPA軸においても、CRHの発現変化は捉えられなかったが、不安反応に関与深いする扁桃体領域においてCRHの発現上昇を示唆する結果を、定量的real time PCR法、酵素抗体法による組織染色およびimageJ画像解析より得た。この結果は、PTSD発症後情動記憶の中枢である同領域において、不安惹起作用を示すCRHの発現異常が定常状態で起こっていることを示し、再負荷された急性ストレスに対する応答性についても影響を与えている可能性が考えられた。そこで23年度は作出されたPTSDモデルラットに対して強制水泳を再負荷し、ストレスや不安行動に関連する室傍核(PVN)、分界条床核(BNST)、扁桃体中心角(CeA)の三つの領域においてCRHの発現レベルを免疫組織化学的に調査した。ストレス再負荷2時間後において、PTSDモデルラットはコントロールラットと比較してPVN、CeAにおいて有意差を認めなかったものの、BNSTにおいて有意に高いCRH免疫陽性反応を認めた。本結果よりCeA-BNST間の神経繊維連絡を通したCRHの分泌異常が予想され、不安様関連行動の増加を伴なうPTSD病症の、内分泌学的理解に繋がると考えられる。なお、前年度申請書記載の「扁桃体CRH発現異常のエピジェネティクスに基づく分子基盤解明」については、1)DNAメチル化について、ChIPおよびバイサルファイトシークエンス法に調査中、2)行動試験については、不安様行動関連の評価に沿い高架式十字迷路試験を検討中である。

基于表观遗传学阐明创伤后应激障碍（PTSD）的病理学在这个自2012年开始的实验中，我们使用SPS大鼠（PTSD的动物模型）来分析大脑中应激相关因子的表达。没有观察到海马中糖皮质激素受体表达的变化。虽然在应激反应的关键 HPA 轴中无法检测到 CRH 表达的变化，但定量实时 PCR 和酶抗体分析表明，杏仁核区域的 CRH 表达增加，这与应激反应密切相关。通过组织学染色和 imageJ 图像分析获得。这些结果表明，具有抗焦虑作用的CRH的异常表达发生在PTSD发病后稳定状态下的同一区域，即情绪记忆的中心，并且它也会影响对重新加载的急性应激的反应性。我以为可能已经给了。因此，在2013财年，我们对创建的PTSD模型大鼠进行了强迫游泳，以针对与压力和焦虑行为相关的室旁核（PVN）、纹状体核（BNST）和杏仁核中心角（CeA）进行重新加载。通过免疫组织化学方法研究了两个区域中 CRH 的表达水平。应激重载后两小时，PTSD模型大鼠的PVN和CeA与对照大鼠相比没有显着差异，但在BNST中观察到显着较高的CRH免疫阳性。这些结果预测 CRH 通过 CeA 和 BNST 之间的神经纤维连接异常分泌，并可能导致对 PTSD 的内分泌学理解，PTSD 伴随着焦虑相关行为的增加。关于前一年申请中所述的“阐明杏仁核 CRH 表达异常的基于表观遗传学的分子基础”，1）目前正在使用 ChIP 和亚硫酸氢盐测序研究 DNA 甲基化，2）行为测试如下：高架十字迷宫目前正在考虑使用测试来评估焦虑样行为。