PLKを標的とした婦人科癌の治療とマイクロアレイによる抗癌作用機序の解析

PLK靶向治疗妇科癌症及微阵列抗癌作用机制分析

基本信息

批准号：
21592139
负责人：
高井教行
金额：
$ 3.24万
依托单位：
Oita University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2012
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21592139/
关键词：
PLK 細胞周期 apoptosis microarray 婦人科癌 Microarray

项目摘要

われわれがヒト胎盤cDNAライブラリーよりクローニングしたpolo like kinase(PLK)は、細胞分裂時の微小管形成に必須で、いわゆる細胞周期調節蛋白である(Hamanaka et al, 1995)。われわれは、ヒト胎盤(Yoshimatsu et al, 1999)、マウス胎盤(Takai et al,1999)、ヒト正常子宮内膜(Takai et al,2000)、子宮体癌(Takai et al, 2001)、卵巣癌(Takai et al, 2001)でのPLKの発現や機能を報告し、特にPLKの婦人科癌における発現がその病理組織学的予後因子と有意に相関していることを報告した(Takai et al, Oncogene, 2005)。PLKはG2/M期に最も強く発現し、cdc2/cyclin B1のリン酸化を活性化したり、cdc25やcdc27も活性化させる。また細胞分裂の終息に関与するAPC(anaphase-promoting complex)も標的としている(Takai et al, 2008)。これまでわれわれは、PLKが婦人科癌治療の分子標的となるかどうかを検討するため、PLKの発現を抑制するβ-hydroxyisovalerylshikonin(β-HIVS)と、PLKの発現は変化させずにPLKの機能を阻害するscytoneminの婦人科癌に対する作用についてin vitro,in vivoで検討し、有意な抗癌作用を確認した。そして、これらの薬剤添加後の遺伝子発現変化をマイクロアレイにより解析した。今年度は、その結果を裏付けるため、northern法、リアルタイムRT-PCR法、western法によるmRNAや蛋白の発現を検討した。その結果、細胞周期・アポトーシス・分化・増殖・転写・シグナル伝達に関連した遺伝子の発現変化を認め、western法でそれらの蛋白発現の変化を確認した。

我们从人胎盘 cDNA 文库中克隆的 Polo 样激酶 (PLK) 是一种所谓的细胞周期调节蛋白，对于细胞分裂过程中微管的形成至关重要 (Hamanaka et al, 1995)。我们研究了人类胎盘（Yoshimatsu 等，1999）、小鼠胎盘（Takai 等，1999）、正常人子宫内膜（Takai 等，2000）、子宫内膜癌（Takai 等，2001）和卵巢癌（Takai 等）等人。报道了 PLK 在妇科癌症中的表达和功能（Takai 等人，Oncogene，2005）。 PLK 在 G2/M 期表达最强，激活 CDC2/细胞周期蛋白 B1 的磷酸化，还激活 CDC25 和 CDC27。它还针对参与细胞分裂终止的 APC（后期促进复合物）（Takai 等，2008）。为了研究PLK是否可以作为治疗妇科癌症的分子靶点，我们使用了抑制PLK表达的β-羟基异戊酰紫草素（β-HIVS），以及在不改变PLK表达的情况下抑制PLK功能的scytonemin的作用。对妇科癌症进行了体外和体内研究，并证实了显着的抗癌作用。然后，使用微阵列分析添加这些药物后基因表达的变化。今年，为了确认结果，我们使用Northern方法、实时RT-PCR方法和Western方法检查了mRNA和蛋白质表达。结果，观察到与细胞周期、凋亡、分化、增殖、转录和信号转导相关的基因表达的变化，并使用Western方法确认蛋白质表达的变化。