遺伝的多型を考慮した発生毒性評価システムの開発のためのモデル細胞の作出

创建模型细胞以开发考虑遗传多态性的发育毒性评价系统

基本信息

批准号：
20890284
负责人：
今西哲
金额：
$ 2.11万
依托单位：
National Institute for Environmental Studies
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20890284/
关键词：
多能性幹細胞リプログラミングモデル細胞

项目摘要

本年度は、マウス胎仔由来線維芽細胞(MEF)からの誘導を試みた。材料には、市販のMEFを用いて、DNAメチル化阻害剤5-aza-2'-deoxycytidine (azaDC)、ヒストン脱アセチル化阻害剤Trichostatin A(Tri A)、ES細胞維持剤BIO、PD98059、エストロゲン受容体関連受容体・(ERRβ)アゴニストDY131の5種類の化学物質を用いて、複数の培養プロトコルを試験した。その結果、azaDC 2.2μM、Tri A 150nM、DY131 30μMを適切な日程で添加した揚合、形態的にマウスES細胞に類似した細胞のコロニーが出現することがわかった。しかし出現率が7.2x106cellsから1コロニーと非常に低く、研当該コロニーの細胞を生化学的な解析に用いることが出来ない状態である。また、増殖速度が遅い、通常のES細胞培養条件では維持できない等の問題点が解っている。現在、効率の上昇と安定した増殖を目指してプロトコルの改良を行っている。さらに並行して、DY131を用いてマウスES細胞の多能性維持が可能であるかを検討している。DY131の標的であるERRβは、ES細胞の多能性の維持に必須であることが複数の研究によって示されている。DY131を上記と同濃度の30μM〜3nM添加したところ、300nMと30nMで、LIF添加と同様な形態の細胞が増殖することが解った。マウスES細胞の多能性はLIFの添加によって維持できることが知られている。しかし、DY131の300nMまたは30nM添加では、数日の内に形態が変化してしまうことが観察された。一方でLIF非添加と比べると、形態の変化が観察される時期が遅く、DY131はES細胞の多能性維持に十分ではないが、一定の効果があることが示唆された。現在、生化学的な解析を行っている。

今年，我们尝试从小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）中进行诱导。所用材料为市售 MEF、DNA 甲基化抑制剂 5-aza-2'-脱氧胞苷 (azaDC)、组蛋白脱乙酰化抑制剂曲古抑菌素 A (Tri A)、ES 细胞维持剂 BIO、PD98059 和雌激素。受体相关受体 (ERRβ) 激动剂 DY131 的五种化学物质。结果显示，当在适当的时间添加2.2μM的azaDC、150nM的TriA和30μM的DY131时，出现了形态与小鼠ES细胞相似的细胞集落。但出现率很低，7.2x106 个细胞/1 个集落，且该集落的细胞不能用于生化分析。此外，ES细胞增殖速度慢、无法维持在正常培养条件下等问题也是已知的。我们目前正在改进协议，旨在提高效率和稳定增长。与此同时，我们还在研究是否可以使用 DY131 维持小鼠 ES 细胞的多能性。研究表明，DY131 的靶标 ERRβ 对于维持 ES 细胞的多能性至关重要。当以与上述相同的浓度（30μM至3nM）添加DY131时，发现与添加LIF时具有相同形态的细胞在300nM和30nM下生长。已知添加LIF可以维持小鼠ES细胞的多能性。然而，当 DY131 以 300 nM 或 30 nM 添加时，观察到形态在几天内发生变化。另一方面，与未添加LIF时相比，较晚观察到形态变化，提示DY131不足以维持ES细胞的多能性，但具有一定的作用。我们目前正在进行生化分析。