骨髄細胞移植とRunx2遺伝子導入による大腿骨頭壊死再生モデル

骨髓细胞移植及Runx2基因导入股骨头坏死再生模型

基本信息

批准号：
20659229
负责人：
三島初
金额：
$ 2.05万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20659229/
关键词：
大腿骨頭壊死 Runx2遺伝子

项目摘要

難病指定である大腿骨頭壊死症に対して人工関節手術を回避可能な骨再生による治療が求められている。本研究の目的は大腿骨頭壊死動物に対する自己骨髄細胞移植術モデルを作製し自己骨髄細胞移植およびCbfal/Runx2の細胞への導入による骨再生効果を評価することである。昨年度は壊死モデルの確立、移植後の組織学的評価が主体であった。本年度はさらに足根骨凍結壊死モデルを利用した実験をすすめた1)大腿骨頭壊死を再現し得る骨壊死動物モデルの確立(昨年度)至適週齢、ステロイド投与量、投与時期等の確認を行い、約60%以上の確率で大腿骨頭の壊死を認めており、これまでの報告と同様の結果を得た。2)自己骨髄細胞移植術モデルの確立壊死モデルラットに対して骨盤骨より自己骨髄血の採取を行い、2回遠心法により赤血球層とplatelet poor plasmaを排除し有核細胞層を採取、股関節の後方アプローチで大腿骨頭近位部を展開し壊死骨頭に穿孔、Runx2遺伝子導入間葉系幹細胞を注入移植した。骨組織の形態計測により再生、壊死の評価を行った。組織学的には、コントロールに比較し、壊死領域の縮小、骨再生が更新することを報告した。しかし、注入細胞の分化、増殖についてのトレースがまだ不十分であり、移植後の細胞挙動の解析を次年度の課題としていた。本年度、これまでの壊死モデルに、コントロールでも再生を認め、よりよいモデルの確立のために、ウサギ足部足根骨を摘出、凍結により骨壊死を作成後、皮下包埋による骨髄血移植後の壊死骨の再生を評価した。コントロールに比較し、骨髄血移植での良い再生を認めた。さらに、上記の濃縮骨髄血移植での評価のために、足根骨モデルを同様に作成し、組織評価、骨形態計測での評価を行い、凍結壊死モデルの妥当性、骨再生の優位性の結果を得ている。結果は今後発表予定であるがさらに、この濃縮骨髄血に対してのRunx2遺伝子導入による評価を予定している。

需要通过可以避免人工关节手术的骨再生来治疗被指定为不治之症的股骨头坏死。本研究的目的是建立股骨头坏死动物自体骨髓细胞移植模型，并评价自体骨髓细胞移植和细胞内导入Cbfal/Runx2的骨再生效果。去年的主要重点是建立坏死模型和移植后组织学评估。今年，我们进一步利用跗骨冷冻坏死模型进行了实验1）建立了可以重现股骨头坏死的骨坏死动物模型（去年）我们确定了最佳年龄、类固醇剂量、给药时机等，股骨头坏死。观察到股骨头的概率约为 60% 或更高，这与之前的报道类似。 2)自体骨髓细胞移植模型的建立从坏死模型大鼠的骨盆骨中采集自体骨髓血，离心两次除去红细胞层和贫血小板血浆，收集近端有核细胞层。采用后路扩张部分股骨头，在坏死股骨头上打孔，注入转染Runx2基因的间充质干细胞进行移植。通过骨组织的形态测量来评估再生和坏死。据报道，在组织学上，与对照组相比，坏死区域减少，骨再生得到更新。然而，对注射细胞的分化和增殖的追踪仍然不够，移植后细胞行为的分析被定为明年的课题。今年，为了建立更好的模型，我们观察了坏死模型和对照的再生情况，在取出兔足跗骨并冷冻形成坏死骨后，进行了皮下埋藏的骨髓血液移植。评价。与对照组相比，骨髓血液移植后观察到良好的再生。此外，为了评价上述浓缩骨髓血移植，以同样的方式制作跗骨模型，并进行组织学和骨形态测量评价，以证实冰冻坏死模型的有效性和骨的优越性。我们正在取得成果。虽然结果计划在未来公布，但我们还计划评估将 Runx2 基因引入这种浓缩骨髓血液中。