天然資源からの中性脂質代謝を制御する低分子化合物の作用機序解析

自然资源中控制中性脂质代谢的低分子量化合物的机制分析

• 批准号: 15J12265
• 负责人: 小林 啓介
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-24 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J12265/
• 关键词: 天然物化学; 脂質代謝; オートファジー

真菌由来化合物ダイナピノンA (DPA) は、中性脂質であるトリアシルグリセロール (TG) およびコレステリルエステル (CE) の細胞内蓄積を阻害する。また、その機序は生合成経路の阻害ではなく分解経路の促進による可能性が示唆されている。そこで、脂肪滴分解経路の1つであるオートファジーへの影響を調べた。DPAの処理により、オートファジーマーカータンパク質であるLC3-II量の濃度依存的な増加が認められた。また、オートファジーの選択的な分解基質であるp62タンパク質の細胞内蓄積量がDPAの処理により濃度依存的に減少したことから、DPAはオートファジーを促進していることが示唆された。さらに、一般的に知られているオートファジー経路上の因子であるmTORやbeclin-1に対するDPA処理による影響を調べたが、これらに対する影響は確認されなかった。この結果から、DPAの作用点はこれら因子より下流、もしくは未知の経路を介している可能性が示唆された。さらに、蛍光緑色タンパク質 (GFP) が融合したLC3を発現する細胞の構築を行った。プラスミドを細胞にトランスフェクトし、シングルセルクローニングを行うことで、GFP-LC3安定発現細胞を取得した。現在は脂肪滴マーカーやリソソームマーカーとGFPの細胞内局在の解析を行っている。さらにケミカルバイオロジー的アプローチとして、ビオチン化誘導体をはじめとしたDPAのケミカルプローブを合成した。これら誘導体と細胞ライセートを反応させ、DPAの結合タンパク質を取得した。今後、各タンパク質の機能解析を通して、DPAが示す表現系との関連をさらに精査する。DPAについては、国内・国外学会で発表を行い、現在論文投稿の準備中である。その他、真菌由来であるボーベリオライドIIIの作用機序についても研究を行い、学会発表だけでなく、論文発表に至った。

真菌衍生的化合物Dynapinone A（DPA）抑制中性脂质，三酰基甘油（TG）和胆固醇酯（CE）的细胞内积累。还建议这种机制可能是由于促进降解途径而不是抑制生物合成途径所致。因此，我们研究了对自噬的影响，这是脂质液滴降解途径之一。用DPA处理的LC3-II量（一种自噬标记蛋白）的浓度依赖性增加。此外，通过使用DPA处理，以浓度依赖性方式降低了p62蛋白的细胞内积累，这是一种自噬的选择性降解底物，这表明DPA促进自噬。此外，我们研究了DPA治疗对MTOR和Beclin-1的影响，MTOR和Beclin-1是自噬途径上通常已知的因素，但对这些途径没有任何影响。这些结果表明，DPA的作用点可能来自这些因素或未知途径的下游。此外，构建了与荧光绿色蛋白（GFP）融合的LC3的细胞。用质粒转染细胞，并进行单细胞克隆以获得稳定表达GFP-LC3的细胞。当前，我们正在分析脂质液滴标记，溶酶体标记和GFP的亚细胞定位。此外，作为一种化学生物学方法，合成了DPA的化学探针，包括生物素化衍生物。将这些衍生物与细胞裂解物反应，以获得DPA的结合蛋白。将来，我们将进一步研究与DPA通过对每种蛋白质的功能分析表达的表型的关联。关于DPA，在国内和国际学术会议上进行了演讲，目前正在准备提交该论文。此外，对Beauberiolide III的作用机理进行了研究，Beauberiolide III的作用机理是从真菌衍生而来的，不仅在会议演讲中，而且在论文中也进行了演讲。

项目成果

真菌由来 beauveriolide III の SOAT アイソザイム阻害活性機構に関する研究

真菌源白僵菌内酯III SOAT同工酶抑制活性机制研究

• 发表时间: 2016
• 作者: 小林 啓介;大城 太一;供田 洋
• 通讯作者: 供田 洋

Dinapinone Aによる脂質分解促進活性に関する研究

地萘酮A促进脂质降解活性的研究

• 发表时间: 2017
• 作者: 小林 啓介;大城 太一;供田 洋
• 通讯作者: 供田 洋

細胞内脂肪滴分解を促進する真菌由来化合物dinapinone Aの作用機序解析

真菌化合物地萘酮A促进细胞内脂滴降解的机制分析

• 发表时间: 2016
• 作者: 小林 啓介;大城 太一;供田 洋
• 通讯作者: 供田 洋

Sterol O-acyltransferaseアイソザイムに対するbeauveriolide IIIの阻害機構の解明

阐明白僵菌内酯III对甾醇O-酰基转移酶同工酶的抑制机制

• 发表时间: 2016
• 作者: 小林 啓介;大城 太一;供田 洋
• 通讯作者: 供田 洋

Sterol O-acyltransferase アイソザイムに対する beauveriolide III の阻害機構の解明

阐明白僵菌内酯III对甾醇O-酰基转移酶同工酶的抑制机制

• 发表时间: 2016
• 作者: 小林 啓介;大城 太一;供田 洋
• 通讯作者: 供田 洋