遺伝子組換えニワトリを用いたインフルエンザワクチン製造の効率化に向けた研究

利用转基因鸡提高流感疫苗生产效率的研究

基本信息

批准号：
15J10381
负责人：
奥嵜雄也
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-04-24 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

Phic31依存的にSia-alpha2,6-Gal糖鎖の合成を行うニワトリST6-1遺伝子を発現する遺伝子組換えニワトリを作製にむけ、レトロウイルスベクターの感染により前年度に作製した遺伝子組換え初代キメラニワトリを交配することで、全身に組換え遺伝子を1コピーで有する遺伝子組換えニワトリの取得を試みた。しかし100羽以上のスクリーニングを行っても、目的の遺伝子組換えニワトリを取得することはできなかった。これは、レトロウイルスベクターによる生殖細胞への遺伝子導入効率が低いことが原因の一つであると考えられた。そこで生殖細胞に対して直接遺伝子導入を行うことで遺伝子組換えニワトリの取得効率増加を試みた。生殖細胞系列のもっとも上流に位置する幹細胞である始原生殖細胞 (PGC) をドナー胚より単離し、これに対して目的遺伝子を有するレンチウイルスベクターを感染させ、これをレシピエント胚に移植することで生殖系キメラニワトリを作製した。これまでにPhic31発現用レンチウイルスベクターは7回、計77胚の受精卵に対して、ST6-1発現用レンチウイルスベクターは5回、計61胚の受精卵に対して遺伝子導入を行った。これらにより作製した生殖系列細胞キメラニワトリについても現在交配・スクリーニングを行うことで目的の遺伝子組換えニワトリの取得を試みている。さらに、遺伝子組換えニワトリの取得向上を目指し、PGCのin vitro培養法の構築も同時に試みた。その結果、ニワトリ2.5日胚より採取した血液中のPGCを半年以上の長期間にわたり増殖および培養し続けることに成功した。これらのPGCは、生体内で生殖腺への定着能を持つことが胚への移植実験により確認された。現在、培養PGCへの効率的な遺伝子導入・改変手法の開発を行っており、本手法により効率的にこれらの遺伝子組換えニワトリが取得できるようになると考えている。

为了生产一种表达鸡ST6-1基因的转基因的鸡，该鸡以Phic31依赖性的方式合成了Sia-Alpha2,6-GAL糖链，我们试图通过通过将原始的Chimeric Chicken与Retrove corviral交配在整个身体中生产的重组基因的一份重组基因的遗传学修饰的鸡肉，并获得一个重组基因的副本。但是，即使在筛选了100多只鸟类之后，也无法获得靶基因遗传改性的鸡。人们认为这是基因使用逆转录病毒载体转移到生殖细胞中的原因之一。因此，我们试图通过将基因直接引入生殖细胞来提高基因修饰的鸡的获取效率。原始生殖细胞（PGC）是种系最上游的干细胞，是从供体胚胎中分离出来的，并用带有感兴趣基因的慢病毒载体感染，并植入受体胚胎中，以产生生成种系奇数鸡。迄今为止，针对77个胚胎的受精卵进行了基因转移至7次，并且对61个胚胎的受精卵的ST6-1表达雄齿载体进行了基因转移五次。我们目前正在尝试通过交配和筛选这些方法产生的种系细胞嵌合鸡来获得所需的遗传修饰的鸡。此外，我们还试图构建一种PGC的体外培养方法，以改善转基因鸡的采集。结果，在2.5天的鸡肉胚胎中收集的血液中的PGC成功生长和培养长期六个月以上。这些PGC可以通过胚胎转移实验在体内定植性腺。当前，我们正在为培养的PGC开发有效的基因转移和修饰方法，我们认为该方法将有效地获得这些转基因鸡。