遺伝子組換えニワトリを用いたインフルエンザワクチン製造の効率化に向けた研究

利用转基因鸡提高流感疫苗生产效率的研究

基本信息

批准号：
15J10381
负责人：
奥嵜雄也
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-04-24 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

Phic31依存的にSia-alpha2,6-Gal糖鎖の合成を行うニワトリST6-1遺伝子を発現する遺伝子組換えニワトリを作製にむけ、レトロウイルスベクターの感染により前年度に作製した遺伝子組換え初代キメラニワトリを交配することで、全身に組換え遺伝子を1コピーで有する遺伝子組換えニワトリの取得を試みた。しかし100羽以上のスクリーニングを行っても、目的の遺伝子組換えニワトリを取得することはできなかった。これは、レトロウイルスベクターによる生殖細胞への遺伝子導入効率が低いことが原因の一つであると考えられた。そこで生殖細胞に対して直接遺伝子導入を行うことで遺伝子組換えニワトリの取得効率増加を試みた。生殖細胞系列のもっとも上流に位置する幹細胞である始原生殖細胞 (PGC) をドナー胚より単離し、これに対して目的遺伝子を有するレンチウイルスベクターを感染させ、これをレシピエント胚に移植することで生殖系キメラニワトリを作製した。これまでにPhic31発現用レンチウイルスベクターは7回、計77胚の受精卵に対して、ST6-1発現用レンチウイルスベクターは5回、計61胚の受精卵に対して遺伝子導入を行った。これらにより作製した生殖系列細胞キメラニワトリについても現在交配・スクリーニングを行うことで目的の遺伝子組換えニワトリの取得を試みている。さらに、遺伝子組換えニワトリの取得向上を目指し、PGCのin vitro培養法の構築も同時に試みた。その結果、ニワトリ2.5日胚より採取した血液中のPGCを半年以上の長期間にわたり増殖および培養し続けることに成功した。これらのPGCは、生体内で生殖腺への定着能を持つことが胚への移植実験により確認された。現在、培養PGCへの効率的な遺伝子導入・改変手法の開発を行っており、本手法により効率的にこれらの遺伝子組換えニワトリが取得できるようになると考えている。

为了创造表达鸡ST6-1基因的转基因鸡，该基因以Phic31依赖性方式合成Sia-alpha2,6-Gal糖链，我们在前一年通过感染逆转录病毒载体创建了基因重组初级嵌合体。通过饲养鸡，我们试图获得全身都有一份重组基因的转基因鸡。然而，即使筛选了100多只鸡，他们也无法获得想要的转基因鸡。其原因之一被认为是逆转录病毒载体将基因导入生殖细胞的效率低。因此，我们试图通过将基因直接导入生殖细胞来提高获得转基因鸡的效率。原始生殖细胞（PGC）是种系中最上游的干细胞，从供体胚胎中分离出来，用含有目标基因的慢病毒载体感染，然后移植到受体胚胎中，从而产生了种系嵌合鸡。迄今为止，我们已经使用慢病毒载体表达Phic31 7次，总共77个胚胎，使用ST6-1表达慢病毒载体进行基因转移5次，总共61个胚胎。我们目前正在尝试通过对使用这些方法生产的种系细胞嵌合鸡进行杂交育种和筛选来获得所需的转基因鸡。此外，为了提高转基因鸡的获得率，我们还尝试构建PGCs的体外培养方法。结果，他们成功地在从2.5天的鸡胚胎中采集的血液中生长和培养了PGC，时间长达半年多。通过胚胎移植实验证实这些PGC具有在体内定植性腺的能力。我们目前正在开发一种将基因导入和修饰到培养的PGC中的有效方法，我们相信这种方法将使我们能够高效地获得这些转基因鸡。