カルシウム結合タンパク質Ｅｆｐ遺伝子改変マウスを用いた自己免疫性関節炎の研究

钙结合蛋白Efp基因修饰小鼠对自身免疫性关节炎的研究

基本信息

批准号：
15J05761
负责人：
井上真以亜
金额：
$ 2.18万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-04-24 至 2018-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J05761/
关键词：
自己反応性T細胞レパトア免疫 T細胞自己免疫

项目摘要

本課題では、自己免疫性関節炎発症の根幹である自己反応性T細胞の発生機構を明らかにすることを目指す。以下に、【１】胸腺におけるT 細胞レパトア制御機構の解析と、【２】末梢T細胞の活性化に寄与する翻訳後修飾分子の解析について報告する。【１】カルシウム結合タンパク質Efpによる胸腺細胞の分化制御：Efp欠損による胸腺細胞の正負の選択への影響の評価、及びEfpの下流分子の特定に取り組んだ。Efp下流分子に関しては、特に関節リウマチの疾患感受性が報告されている遺伝子に着目し、EfpによるT細胞レパトア制御に関わる因子の検討を進めた。具体的な方法としては、Efp欠損胸腺細胞にて発現上昇した遺伝子をレトロウイルスベクターにより胸腺細胞に導入した後、胎児胸腺器官培養系にて分化させることで、過剰発現により正負の選択が障害される遺伝子を選定した。今後、候補遺伝子に対する遺伝子欠損マウスの作製し、T細胞レパトア制御を生体レベルで検証することを目指す。【２】新規翻訳後修飾分子によるT細胞の活性制御：TCR刺激に伴って発現上昇する、特定の翻訳後修飾酵素のT細胞特異的遺伝子欠損マウスの解析を行った。当該分子は、iNKT細胞の早期分化と、末梢のCD4およびCD8T細胞の活性化に重要であることが示された。さらにRNA-seq解析やフローサイトメトリー法を用いて、当該分子の下流で制御される遺伝子や、翻訳後修飾の基質を特定した。以上の結果により、当該翻訳後修飾分子の制御異常が、末梢T細胞の異常な活性化に関連する可能性が考えられた。

该主题旨在阐明自身反应性T细胞的发育机制，这是自身免疫性关节炎发作的基础。下面，我们报告了胸腺中T细胞库调节的[1]分析，并[2]分析翻译后修饰的分子，这些分子有助于周围T细胞的激活。 [1]通过钙结合蛋白EFP控制胸腺细胞的分化：我们研究了EFP缺乏对胸腺细胞阳性和阴性选择的影响，并鉴定出EFP的下游分子。关于下游EFP分子，我们专注于据报道易受类风湿关节炎疾病的基因，并研究了EFP调节T细胞库的因素。一种特定的方法是将在EFP缺陷型胸腺细胞中升高的基因使用逆转录病毒载体中升高到胸腺细胞中，然后在胎儿胸腺器官培养系统中进行区分，从而过度表达会损害正选择和阴性选择。将来，我们旨在为候选基因创建基因缺陷小鼠，并在生物学水平上验证T细胞库的调节。 [2]通过一种新型翻译后修饰分子来控制T细胞活性：在特定的翻译后修饰酶中缺乏T细胞特异性基因的小鼠分析，该酶表示为TCR刺激。该分子已被证明对于早期分化Inkt细胞以及周围CD4和CD8T细胞的激活很重要。此外，使用RNA-seq分析和流式细胞仪来鉴定分子下游控制的基因和底物进行翻译后修饰。以上结果表明，翻译后修饰分子的异常调节可能与外围T细胞的异常激活有关。