Ｓｔｏｃｈａｓｔｉｃアプローチによる歯根膜幹細胞の同定

使用随机方法鉴定牙周膜干细胞

• 批准号: 15J03981
• 负责人: 岩山 智明
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-24 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J03981/
• 关键词: 歯根膜; 間葉系幹細胞; 系譜解析; ノックインマウス; 周皮細胞; Nestin

本研究は、歯根膜組織における間葉系幹細胞もしくは前駆細胞集団の局在や機能を同定し、同細胞群がどのようなプロセスで様々な間葉系細胞へと分化するのかを明らかにすることで、歯周組織の恒常性維持と再生機構の理解を深めることを目的としている。本年度は主に以下の3つの成果を得た。1.Dermo1-Cre；R26-Tomatoマウスの歯周組織の組織学的解析により、歯根膜組織中の間葉系細胞のほぼすべてがTomato陽性であったことから、「H2BGFP標識保持細胞」の同定に用いるCreマウスをDermo1-Creとした。Dermo1-Cre; R26-tTA;TetO-H2BGFPマウスを交配により作製し、6週齢からドキシサイクリンを投与し、経時的に解析したところ、6ヶ月経過するとほとんどの細胞でGFP標識が消失していることが明らかとなった。2.歯根膜細胞の初代培養プロトコルを確立し、Nestin-GFPマウス由来の歯根膜細胞の単離およびセルソーターによるGFP陽性細胞の分取・培養、さらにはシングル・セルソーティング法によるNestin-GFP陽性クローンを樹立した。同細胞は高い分化能を持つ間葉系幹細胞である可能性が示唆されており、今後の歯根膜細胞を解析するための有用なリソースとなることが期待される。3.Nestin-Cre; Nestin-GFP; R26-Tomatoマウスの第二臼歯に5-0絹糸を結紮することにより、歯槽骨吸収を惹起する骨吸収モデル実験を行った。絹糸除去後の歯周組織修復過程におけるNestin陽性細胞の系譜を経時的に解析したところ、平常時は毛細血管近傍にのみ位置するペリサイトであったNestin陽性細胞が、修復時には組織全体に広がって、修復組織の大部分を占めることが明らかとなった。以上の得られた結果を取りまとめ、国内の学会で発表を行った。

这项研究的目的是通过鉴定牙周韧带组织中间充质干细胞或祖细胞细胞群的定位和功能来维持牙周组织的体内平衡，并加深对再生机制的了解，并通过阐明相同细胞种群将相同细胞分化为各种间质细胞的过程。 This year, we achieved three main results: 1. Dermo1-Cre: Histological analysis of periodontal tissues of R26-Tomato mice showed that almost all of the mesenchymal cells in the periodontal ligament tissue were Tomato-positive, so Dermo1-Cre was used as Cre mice used to identify "H2BGFP label-retaining cells." Dermo1-cre;通过交配制备R26-TTA; TETO-H2BGFP小鼠，并从6周龄开始进行强力霉素，并且随着时间的推移分析显示，在6个月后，大多数细胞中的GFP标记消失了。 2。建立了用于牙周韧带细胞的原发性培养方案，并通过细胞分离器分离了源自巢蛋白GFP小鼠的牙周韧带细胞，制备和培养的GFP阳性细胞，并使用单细胞分类建立Nestin-GFP阳性克隆。已经提出，该细胞可能是具有高分化潜力的间充质干细胞，预计将成为对牙周韧带细胞的未来分析的有用资源。 3。进行骨吸收模型实验，以通过将5-0丝线连接到巢穴的第二磨牙，以诱导肺泡骨吸收。 Nestin-GFP; R26-tomato小鼠。随着时间的推移，丝绸去除后牙周组织修复过程中巢蛋白阳性细胞的谱系，据表明，巢蛋白阳性细胞（通常仅位于毛细血管附近的周细胞）在修复过程中遍布整个组织，并考虑了大部分修复的组织。上面获得的结果汇编并在国内学术会议上介绍。

项目成果

PDGFRαシグナルによるpericytesの運命決定機構の解明

PDGFRα信号阐明周细胞的命运决定机制

• 发表时间: 2016
• 作者: 岩山智明;脇坂 聡;村上伸也
• 通讯作者: 村上伸也

Col-GFPマウス歯周組織の組織学的解析

Col-GFP 小鼠牙周组织的组织学分析

• 发表时间: 2017
• 作者: 上田 亜美;岩山 智明;村上 伸也
• 通讯作者: 村上 伸也

Cell-autonomous contribution of nestin-positive cells to periodontal tissue repair

巢蛋白阳性细胞对牙周组织修复的细胞自主贡献

• 发表时间: 2017
• 作者: T Iwayama;T Ueda;K Tomita;A Hirai;M Takedachi;S Wakisaka;S Murakami
• 通讯作者: S Murakami

Nestin+ cells are pericytes in periodontal ligament

巢蛋白细胞是牙周膜中的周细胞

• 发表时间: 2015
• 作者: Tomoaki Iwayama;Satoshi Wakisaka and Shinya Murakami
• 通讯作者: Satoshi Wakisaka and Shinya Murakami

Detrimental effects of duplicate reads and low complexity regions on RNA- and ChIP-seq data.

• DOI: 10.1186/1471-2105-16-s13-s10
• 发表时间: 2015
• 期刊: BMC bioinformatics
• 影响因子: 3
• 作者: Dozmorov MG;Adrianto I;Giles CB;Glass E;Glenn SB;Montgomery C;Sivils KL;Olson LE;Iwayama T;Freeman WM;Lessard CJ;Wren JD
• 通讯作者: Wren JD